论文部分内容阅读
在人类历史上,流行性感冒病毒曾多次造成全世界范围的大流行,对社会公共安全和经济生产造成了严重的危害。由于流感病毒的高变异性,需要对其进行持续的监控和预防,并坚持开发抗病毒的新药。研究流感病毒侵染宿主细胞的机制能够更深入的了解病毒致病机理,为流行性感冒的预防和治疗奠定理论基础,具有深远的社会和经济意义。流感病毒侵染宿主细胞时,病毒进入细胞是第一关键步骤。病毒由此跨过细胞质膜阻隔,进入细胞内部进一步利用细胞自身的机能为病毒复制服务。流感病毒与细胞表面分子间复杂的相互作用致使认识病毒入胞机制异常困难,而单病毒示踪技术为解决此难题创造了良机。相较于只能获取静态平均化结果的传统研究方法,实时原位的单病毒示踪技术则能实现对单个病毒入胞行为的连续可视化监测。荧光性能优异的量子点标记的单病毒示踪技术更是凸显出其在研究病毒学中多重相互作用的动态分子事件方面无可比拟的优势。本文利用量子点标记的单病毒示踪技术,实现了流感病毒通过内吞作用进入宿主细胞动态过程的可视化,揭示了流感病毒在此过程中的运动行为机制,证明网格蛋白介导的内吞作用是流感病毒侵染MDCK细胞的主要途径。通过比较病毒在此入胞途径中募集网格蛋白、发动蛋白和附属蛋白的行为,我们分析了三种蛋白在病毒入胞过程中不同的作用。同时发现了网格蛋白和发动蛋白募集的非同步性,提出了病毒依赖网格蛋白内吞途径的时间顺序模型。此外,我们还发现大量最终并未入胞的病毒也诱导了网格蛋白、发动蛋白和辅助蛋白募集。相较于成功入胞的病毒,这种募集过程持续时间较短。我们分析造成这种现象的原因是网格蛋白包被的质膜凹陷在生长过程中经历了筛选阶段,只有少数病毒诱导的质膜凹陷能进入质膜分裂阶段成为内吞囊泡。我们分析了另一种不依赖网格蛋白的流感病毒入胞途径的诸多特点,证明病毒在此途径中通过大胞饮的方式入胞。我们证明了病毒的两种内吞途径都需要微丝组装的参与,并且进一步可视化了流感病毒在入胞过程中募集微丝组装相关蛋白的过程,初步探讨了微丝组装在病毒的内吞作用中的作用。微丝组装不仅能为质膜分裂提供额外助力,还协助了含有病毒的内吞囊泡向胞内的运输。证明了流感病毒的大胞饮入胞方式也依赖于发动蛋白。在两种入胞途径中,发动蛋白的作用略有差别,它都推动了内吞过程中的质膜分裂,但在依赖网格蛋白的入胞途径中还参与网格蛋白包被的质膜凹陷的生长熟化过程。