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目的1.研究冬凌草甲素(Oridonin,Ori)对人肝癌细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用。2.探讨冬凌草甲素诱导人肝癌细胞凋亡的分子机制。方法1.不同浓度的冬凌草甲素作用于肝癌细胞株HCCLM3和HepG2后,CCK-8检测冬凌草甲素对肝癌细胞的增殖抑制效率;浓度分别为0、5、10、20μM的冬凌草甲素作用于肝癌细胞株HCCLM3和HepG2后,集落形成实验观察肝癌细胞的克隆形成情况,Annexin-FITC/PI双染和流式细胞仪方法检测细胞的凋亡情况。2.浓度分别为0、5、10、20μM的冬凌草甲素作用于肝癌细胞株HCCLM3和HepG2后,Western Blot检测凋亡相关蛋白的表达;应用siRNA技术在肝癌细胞株HCCLM3和HepG2中沉默Mcl-1,流式细胞仪分别检测肝癌细胞株HCCLM3和HepG2对照组、Oridonin 10μM、siMcl-1 HCCLM3和siMcl-1HepG2、Oridonin 10μM联合siMcl-1 HCCLM3和siMcl-1HepG2四组的凋亡率变化。结果1.CCK-8法检测结果显示,低浓度的冬凌草甲素对肝癌细胞株HCCLM3、HepG2的抑制作用较弱,高浓度的冬凌草甲素对肝癌细胞株HCCLM3、HepG2的抑制作用较强,其抑制作用呈剂量依赖性;集落形成实验结果表明冬凌草甲素药物浓度越高,其抑制肝癌细胞克隆形成能力越强;浓度为5μM、10μM和20μM的冬凌草甲素处理肝癌细胞HCCLM3 24h后,流式细胞仪检测其细胞凋亡率分别为20.1%、41.5%和74.3%,明显高于空白对照组的6.7%,差异具有统计学意义(P<0.05);浓度为5μM、10μM和20μM的冬凌草甲素处理肝癌细胞HepG2 24h后,流式细胞仪检测其细胞凋亡率分别为20.3%、42.6%和69.2%,明显高于空白对照组的4.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.Western blot检测发现10μM的冬凌草甲素处理HCCLM3和HepG2肝癌细胞株24 h后,均能使caspase-3、PARP裂解激活;同时检测结果显示10μM、20μM的冬凌草甲素作用于两株肝癌细胞株24 h后,Bcl-2抑凋亡家族蛋白Mcl-1的表达明显受到抑制,而对Bcl-2抑凋亡家族蛋白中另外两个主要蛋白Bcl-2、Bcl-xL则没有明显影响。应用siRNA技术在肝癌细胞株HCCLM3和HepG2中沉默Mcl-1,流式细胞仪检测结果发现在肝癌细胞株HCCLM3中Oridonin 10μM、siMcl-1、Oridonin 10μM联合siMcl-1处理组的凋亡率分别为39.2%、41.6%、43.7%,均明显高于对照组(5.3%),差异有统计学意义(P<0.05),而Oridonin10μM、siMcl-1、Oridonin 10μM联合siMcl-1处理组三组间的凋亡率却无统计学差异;在肝癌细胞株HepG2中Oridonin 10μM、siMcl-1、Oridonin 10μM联合siMcl-1处理组的凋亡率分别为40.3%、42.4%、44.8%,均明显高于对照组(4.6%),差异有统计学意义(P<0.05),而Oridonin 10μM、siMcl-1、Oridonin 10μM联合siMcl-1处理组三组间的凋亡率却无统计学差异;同时我们发现与siMcl-1HCCLM3和siMcl-1HepG2组相比,10μM的Oridonin处理siMcl-1 HCCLM3和siMcl-1HepG2后并不能显著增加凋亡率。结论1.冬凌草甲素可以抑制肝癌细胞的增殖并诱导肝癌细胞凋亡。2.冬凌草甲素抗肝癌机制可能是通过下调Mcl-1的表达进而诱导凋亡。