【摘 要】
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蚕素是家蚕体内一类5 kD大小的神经肽,与人的胰岛素有40%左右的序列同源性,属于胰岛素家族。通过国内外学者的研究,其部分生物学功能已被证实。蚕素能降低家蚕血液淋巴内糖类
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蚕素是家蚕体内一类5 kD大小的神经肽,与人的胰岛素有40%左右的序列同源性,属于胰岛素家族。通过国内外学者的研究,其部分生物学功能已被证实。蚕素能降低家蚕血液淋巴内糖类的含量,能够提高中肠以及肌肉等组织中海藻糖酶的活性,并且发现葡萄糖能刺激家蚕体内蚕素的分泌。由于蚕素在天然蚕蛹中的含量极低,所以我们尝试利用基因工程的方法来提高其在蚕蛹中的含量并对其功能作进一步的研究。
本研究筛选一条与人类胰岛素基因同源性较高的蚕素基因BombyxinA-4,根据其ORF序列,利用重叠延伸PCR的技术,扩增得到B链和A链串连在一起的目的片段BA,再将获得的目的片段克隆到表达载体pGEX-4T-1上,将重组表达载体pGEX-4T-1-BA,转化感受态细胞E.coli Rosetta-gami(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达后,收集菌体,利用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱纯化得到了1.34 mg/mL的目的蛋白,并免疫新西兰雄兔,获得检测抗体。
从家蚕蛹cDNA中扩增得到蚕素基因BombyxinA-4完整的ORF序列。利用Bac-to-Bac系统,将目的基因重组至Bacmid上,转染家蚕BmN细胞,获得重组病毒vBmBombyxinA-4,再将该重组病毒接种于家蚕蛹,待大部分家蚕蛹出现明显病毒感染症状后,收集并进行Western blotting检测。结果表明蚕素BombyxinA-4在家蚕蛹中得到过表达,该表达产物能够促进BmN细胞的生长,同时利用正常的家蚕蛹和感染重组病毒的家蚕蛹分别制成冻干粉,在高血糖小鼠模型上进行了降血糖作用的口服给药研究,结果发现感染重组病毒的家蚕蛹比正常家蚕蛹的降血糖作用明显。
感染带有蚕素基因BombyxinA-4的重组病毒家蚕蛹,是一种潜在的降血糖类蛋白药物,利用蚕蛹的高效表达系统,为开发新型的降血糖类的药品和保健品打下了良好的基础。
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