单链抗体包涵体的复性研究

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谷胱甘肽过氧化酶(GPX)是生物机体内重要的抗氧化酶之一,在细胞、血液及组织中广泛分布.它可消除机体内的过氧化氢及脂质氢过氧化物,阻断氧自由基对机体的进一步损伤,从而保证细胞及组织正常生理功能的发挥.但由于GPX在机体内的含量较低、稳定性差,不利于大规模制备及应用.因此科学家们将目光转向了GPX模拟物的研究.我们实验室利用基因工程法成功表达了含有谷胱甘肽结合位点的单链抗体,并用化学突变法得到了含硒单链抗体酶.由于scFv表达产物以包涵体形式存在,需要变、复性恢复其天然构象与功能,而包涵体蛋白的变性复性一直是大肠杆菌系统表达外源蛋白的难题,其周期长,产率低,并且因蛋白的不同而使复性方法与效果有很大差异,这就需要在具体实验中具体摸索.我们比较了稀释法、透析法、凝胶过滤柱复性、金属螯和层析柱复性和人工分子伴侣法等复性方法.其中尿素浓度梯度凝胶过滤法和人工分子伴侣法复性效率较高,且可以在高蛋白浓度下实现复性,可作为进一步研究的方向.
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