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目的:真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)和特发性骨髓纤维化(IMF)组成了经典的BCR/ABL阴性的慢性骨髓增殖性疾病(cMPDS)。与BCR/ABL阳性的CML不同,在PV、ET和IMF患者没有发现可重复性染色体易位,也无特效治疗药物。近期的一些研究发现BCR/ABL阴性的cMPDS患者中广泛存在一种特异性基因突变: JAK2基因的第1849位点发生G→T突变,导致JAK2蛋白第617位的缬氨酸被苯丙氨酸代替(简称为JAK2 V617F)。约90%的PV患者存在该突变,并且在其他BCR/ABL阴性的cMPDS患者如ET和IMF中也有相当的比例,而在其他血液病中罕见此突变。ETS2(人红血细胞增多症病毒致癌基因同源体2)是ETS转录因子家族的一员,ETS2基因定位于21号染色体21q22.3,编码分子量为56-kDa的蛋白质,它在肿瘤发生、骨骼发育和免疫应答中扮演重要角色。近期有研究表明在BCR/ABL阴性的cMPDs中, JAK2 V617F点突变阳性患者的ETS2 mRNA表达水平高于阴性者。本研究旨在探讨BCR/ABL阴性的cMPDs中JAK2 V617F点突变的发生率、ETS2 mRNA表达情况及其与cMPDs分类、疗效、并发症发生率及预后之间的关系。通过JAK2 V617F突变率与ETS2 mRNA表达情况的相关性研究,了解JAK2 V617F点突变与ETS2 mRNA表达水平的异常在cMPDs发生发展中的作用机制,期望为寻找针对性治疗方法奠定基础。方法:1本实验研究对象包括62例BCR/ABL阴性的cMPDs患者[26例PV、26例ET、9例IMF、1例慢性中性粒细胞性白血病(CNL)];20例慢性粒细胞性白血病(CML)患者、10例急性白血病(AL)患者,15名健康志愿者。62例cMPDS患者为研究组、其他患者和正常人为对照组。所有病例符合WHO诊断标准。2从各组患者及健康志愿者的骨髓或血液中提取单个核细胞,再从其中提取总RNA及DNA。3用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组ETS2 mRNA的表达水平。4用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)筛选各组JAK2V617F点突变,根据检查结果将62例cMPDs患者分为突变阳性组及阴性组。全部阳性标本和随机抽取的部分阴性对照标本,经PCR、产物纯化后,进行基因测序以验证突变结果。5分别观察和比较各组病例的临床特征,包括:性别、发病年龄、临床症状及体征、血象、骨髓像、并发症、疗效和预后等。6统计学处理:采用单因素方差分析比较ETS2 mRNA在MPD组、急性白血病组、慢性粒细胞白血病组与正常对照组中的表达水平有无差异;卡方检验分析JAK2 V617F点突变率在各组的差异。ETS2 mRNA表达水平在cMPDs JAK2 V617F点突变阳性组与阴性组比用t检验。所有数据用SPSS11.0统计软件分析处理。结果:1 62例BCR/ABL阴性的cMPDs患者中,共有44例患者检测到JAK2 V617F点突变,包括23/26(88.46%)例PV,15/26(57.69%)例ET,5/9(55.56%)例IMF。1/1(100.00%)例CNL。在CML、AL及健康志愿者中未检测到JAK2 V617F点突变。2 ETS2 mRNA表达水平在cMPDs组(平均值0.2876,阳性率81.96%)、CML组(平均值0.4133,阳性率85.0%)和AL(平均值0.5320,阳性率80.0%)组均显著高于健康志愿者(平均值0.106,阳性率46.7%)。cMPDs组、CML组、AL组之间比较,ETS2 mRNA表达水平均值无明显差别。3在cMPDs组JAK2 V617F点突变阳性的病例中ETS2 mRNA表达水平(平均值0.323,阳性率86.0%)明显高于突变阴性病例(平均值0.203,阳性率72.2%),差别有显著意义,P=0.022。4临床特征对比:PV患者中JAK2 V617F点突变阳性组的外周血白细胞计数显著高于阴性组(平均值18.2×109/L vs 7.6×109/L,P=0.035),血小板计数显著高于阴性组(平均值479×109/L vs 277×109/L,P=0.025)。ET患者中JAK2 V617F点突变阳性组的血红蛋白显著高于阴性组(平均值146g/L vs 122g/L, P=0.001),白细胞计数显著高于阴性组(平均值14.6×109/L vs 10.9×109/L, P=0.044)。在IMF患者中JAK2 V617F点突变阳性组与阴性组之间的临床特征无显著性差异,P>0.05。结论:1大部分cMPDs患者存在JAK2 V617F点突变(PV 88.46%、ET 57.69%、IMF 55.56%),提示JAK2 V617F点突变所产生的激活作用是PV、ET、IMF的重要发病机制。2在JAK2 V617F点突变阳性的cMPDs患者中,ETS2 mRNA的表达水平高于JAK2 V617F点突变阴性的cMPDS患者。