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精液冷冻保存是随着人工授精技术的应用与发展而共同发展起来的精子体外保存技术。作为保存生物种质资源的一种重要的技术方法,其在农业、生物、医学等领域发挥着重要作用。冷冻精液的保存技术目前已经广泛运用于畜牧业的生产当中,对于畜牧养殖,冷冻保存精液能够大幅度提高良种公畜的利用率,降低其饲养数量及成本,减少相关传染性疾病传播,扩大种公畜在地域和时间上的利用范围,对于家畜繁殖与育种、提高良种率等方面均具有重要的意义。香菇多糖作为一种具有免疫调节和抗氧化功能的功能性多糖,目前在多个领域有着较为广泛的研究。大量研究证明,在精液冷冻稀释液中补充抗氧化剂能够提高冻融后的精液品质,然而香菇多糖在精液保存方面尚未有相关研究报道。因此,本试验通过探究含有不同浓度的香菇多糖的奶牛精液冷冻稀释液对冻融精子运动性能、精子结构以及抗氧化性能的影响,以期揭示香菇多糖对奶牛冷冻精液冷冻保存的效果,同时筛选出对奶牛精液冷冻保存的最适添加剂量。本研究主要获得以下结果:1.在奶牛精液冷冻稀释液中添加香菇多糖能够有效提高冻融后的精子活率、前向运动率、直线速率、曲线运动速度、平均路径速度和直线性。与其他处理组相比,稀释液中添加25 mg/L香菇多糖组的保存效果最好,显著提高了精子活率(44.86%)、前向运动率(35.21%)、直线速率(84.87μm/s)、曲线速率(122.75μm/s)、平均路径速度(104.74μm/s)以及直线性(79.44%)(P<0.05)。稀释液中添加5 mg/L香菇多糖的组保存效果次之,而添加50 mg/L和100 mg/L的香菇多糖保存效果最差,显著低于对照组(P<0.05)。2.在奶牛精液冷冻稀释液中添加一定浓度的香菇多糖能够有效提高冻融后精子的质膜完整率和顶体完整率,其中添加5 mg/L和25 mg/L香菇多糖效果最优,精子冷冻-解冻后的质膜完整率以及顶体完整率分别为46.84%和48.10%,62.83%和64.21%,显著高于对照组(P<0.05),但5 mg/L和25 mg/L组之间差异不显著(P>0.05)。稀释液中添加1 mg/L香菇多糖的奶牛精子质膜完整率和顶体完整率相较于对照组差异不显著(P>0.05),而稀释液中添加50 mg/L和100 mg/L的香菇多糖组时奶牛精子的质膜完整率和顶体完整率显著低于对照组(P<0.05)。精子活率与顶体完整性和质膜完整性的相关性强(r=0.977、r=0.979),且呈显著相关(P<0.05)。顶体完整性与质膜完整性相关性强(r=0.990),呈显著相关(P<0.05)。3.在奶牛精液冷冻稀释液中添加5 mg/L和25 mg/L的香菇多糖能够有效提高冷冻-解冻牛精子T-AOC、GSH-Px活性,降低MDA含量,其中25 mg/L处理组与其他组相比,其T-AOC和GSH-Px活性显著高于其他组(P<0.05);MDA浓度显著低于对照组(P<0.05),但与5 mg/L组并无显著差异。稀释液中添加50 mg/L和100 mg/L香菇多糖组奶牛精子T-AOC显著高于对照组(P<0.05),但均显著低于5 mg/L组(P<0.05),而GSH-Px活力与对照组并无显著差异。稀释液中添加50 mg/L和100 mg/L香菇多糖时,冷冻-解冻后精子的MDA含量显著高于其他组(P<0.05),但两组间并无显著差异(P>0.05)。稀释液中添加1 mg/L香菇多糖组其T-AOC、GSH-Px活性均高于对照组(P<0.05),其MDA浓度低于对照组,但差异不显著。精子活率与MDA浓度呈显著的负相关关系(P<0.05),精子活率与T-AOC活性、GSH-Px活性呈显著的正相关关系(P<0.05)。MDA浓度与GSH-Px活性、T-AOC活性均呈负相关关系,且差异不显著(P>0.05);GSH-Px活性与T-AOC活性呈显著的相关性(P<0.05)。因此,本研究证明香菇多糖在奶牛精液冷冻稀释液中作为保护剂能够有效提高精液冷冻保存质量,最佳添加浓度为25 mg/L,可显著提高冻融后的精子活率、前向运动率、直线速率、曲线运动速度、平均路径速度和直线性,提高冻融后精子的质膜完整率和顶体完整率,提高冷冻-解冻奶牛精子T-AOC、GSH-Px活性,降低MDA含量。在精液稀释液中添加适当浓度的香菇多糖,对精子细胞有一定的保护作用,对奶牛精液冷冻保存的研究方面具有重要的意义。