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α-乳白蛋白(α-lactalbumin,α-LA)是母乳中的生物活性蛋白之一,消化后生成的活性肽具有免疫调节、抗病毒、抑制血压的活性,但其对肠道菌群的调整作用尚无报道。目前α-乳白蛋白被广泛应用于婴儿配方奶粉的添加,因此,研究α-乳白蛋白对于调节婴儿肠道菌群的平衡,提升益生菌的相对丰度,以及探究其在婴配粉中的合理添加量意义重大。本研究通过了体外模拟婴儿胃肠道消化探索了不同浓度的α-乳白蛋白消化液对益生菌和致病菌的作用,分别选择双歧杆菌(Bifidobacterium BB12、Bi-07)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、益生混合菌、大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)作为研究目标。结果发现,α-乳白蛋白消化液对双歧杆菌BB-12、Bi-07、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌促进的最佳浓度分别为0.2 mg/mL、0.02 mg/mL、0.1 mg/mL、0.2 mg/mL;对大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、产气荚膜梭菌抑制的最佳浓度分别为1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5mg/mL。α-乳白蛋白消化液0.2 mg/mL提高了混合菌群中益生菌的活菌数,同时降低了大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、产气荚膜梭菌的活菌数。进一步通过大鼠试验探究了α-乳白蛋白对免疫和肠道菌群的影响。结果表明,不同剂量的α-乳白蛋白均能显著提高大鼠的胸腺指数和外周血中CD3~+百分率(p<0.05);中、高剂量能显著提高CD4~+的百分率及CD4~+/CD8~+、血清中IL-10水平(p<0.05);中剂量能显著提高大鼠血清中IL-4、IgG、IgM的含量(p<0.05);低剂量能有效提高IgA、IgG的含量(p<0.05)。Alpha多样性分析表明,试验28天时灌胃高、中剂量的α-乳白蛋白在提高肠道菌群物种多样性的同时兼顾了均匀性。Beta多样性分析表明,试验28天时各剂量组与试验组区分显著,α-乳白蛋白对群落结构产生影响。物种组成分析表明,在门水平上,大鼠肠道菌群以厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)为主,不同剂量的α-乳白蛋白在门水平的调节与母乳相似。在属水平上,中、低剂量α-乳白蛋白能提高乳杆菌(Lactobacillus)、布劳特氏菌(Blautia)、阿克曼氏菌(Akkermansia)的相对丰度;各剂量组均能使普氏菌科(Prevotellaceae)成员、拟杆菌(Bacteroides)相对丰度不同程度的降低,且作用效果随浓度降低而提高;各剂量组均能提高木质真菌(Eubacterium xylanophilum group)相对丰度并维持瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)成员、毛螺旋菌科(Lachnospiraceae)成员、梭菌科下的未知属(Clostridium sensu stricto-1)相对丰度保持恒定。综上所述,α-乳白蛋白可能在消化过程中释放生物活性肽调节婴儿肠道菌群发展,肠道菌群的代谢产物介导体液免疫,最终影响人的疾病与健康。100 mg/kg·BW是调整肠道菌群的适宜剂量,本试验结果可为婴配粉中α-乳白蛋白科学的添加量提供理论支持,为婴儿科学健康喂养打下基础,为我国婴幼儿的健康生长发育提供保障。