为探索SSCs体外自增殖的条件及体外快速扩增的方法。我们分离了6～8日龄昆明乳鼠的睾丸细胞，采用Percoll梯度离心法富集SSCs；将所得支持细胞用丝裂霉素C处理后作为饲养层，以DMEM为基本培养基，添加5％的FBS和10<3>U/ml的LIF，培养SSCs；以SSCs特异性表面分子Thy-1为标志，对培养的细胞进行了免疫荧光鉴定。结果表明，该体系下，SSCs贴壁时间为6 h～9 h，48 h后可见细胞分裂，迅速增殖出现在接种12 d以后。接种后第20 d形成数十至上百个细胞的细胞团，细胞总数增加了45～245倍，100倍光学显微镜观察可见，单位视野内细胞团数为26±4。原代培养20 d和传代培养14 d的细胞为Thy-1阳性。该培养体系适合SSCs短期快速增殖。 为了探索雌激素对隐睾小鼠SSCs增殖的影响，我们选取10日龄雄性昆明乳鼠，行隐睾手术后随机分组，分别皮下注射不同剂量的17-雌二醇(E2)，连续处理35 d。结果表明，低剂量E2对隐睾小鼠SSCs的增殖无明显作用，但中等剂量和高剂量的E2能够刺激其自增殖。此外，本研究依据抑制素B、FSH、E2、LH以及睾酮水平的变化，对E2促进SSCs自增殖的调控机制作了探讨。 鉴于此，为筛选SSCs自增殖相关因子，收集了高剂量E2(1 μg/g体重)处理组小鼠睾丸，提取总蛋白，应用双向电泳，分析E2处理组与对照组之间差异表达蛋白。结果显示，4种差异表达蛋白被鉴定为HERP，PEBP1，Stathmin蛋白和一个未命名蛋白(Px)。其中，HERP在各不同处理组表达量为：雌二醇处理组>隐睾对照组>正常对照组；另外3种蛋白与此相反。 在此基础上，克隆了Stathmin的基因，构建了pEGFP-stathmin融合基因，分别转染了SSCs和睾丸支持细胞。同时，对stathmin基因的mRNA进行了原位杂交定位。结果显示，stathmin基因的mRNA强表达于小鼠精原细胞，弱表达于初级精母细胞和圆形精子细胞；转染stathmin基因后，培养细胞统计结果表明，Stathmin对SSCs的体外增殖具有一定的促进作用，并且可能主要促进其分化型增殖。