【摘 要】
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背景肿瘤细胞重新编程其细胞代谢,以满足其异常的增殖、侵袭和转移。肝细胞癌是肝脏中的首要恶性肿瘤疾病,死亡率较高。术后复发和转移是导致肝癌患者死亡的主要原因。因此,为提高肝癌患者的存活率,更好地理解肝癌细胞的异常代谢是非常有必要的。最近研究表明,脯氨酸代谢在代谢重编程中起重要作用,影响着癌症的发生和发展。ALDH18A1是一种依赖ATP和NAD（P）H的酶,是参与脯氨酸合成的关键酶,催化谷氨酸转变为
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背景肿瘤细胞重新编程其细胞代谢,以满足其异常的增殖、侵袭和转移。肝细胞癌是肝脏中的首要恶性肿瘤疾病,死亡率较高。术后复发和转移是导致肝癌患者死亡的主要原因。因此,为提高肝癌患者的存活率,更好地理解肝癌细胞的异常代谢是非常有必要的。最近研究表明,脯氨酸代谢在代谢重编程中起重要作用,影响着癌症的发生和发展。ALDH18A1是一种依赖ATP和NAD（P）H的酶,是参与脯氨酸合成的关键酶,催化谷氨酸转变为Δ-吡咯啉-5-羧酸（P5C）,在肝癌等多种肿瘤组织中表达均上调。蛋白质乙酰化是一种重要的翻译后修饰,在能量代谢中起着至关重要的作用。但目前对ALDH18A1乙酰化修饰的调控及其在肝癌细胞中的作用研究较少。目的研究ALDH18A1对肝癌细胞增殖和迁移的影响;探讨ALDH18A1的乙酰化修饰机制;初步探讨ALDH18A1乙酰化修饰对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法1、用转染、Western blot、qRT-PCR等方法检测肝癌细胞中ALDH18A1蛋白和mRNA表达水平,用CCK8、细胞划痕和Transwell等试验,检测敲低ALDH18A1对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。2、用Western blot检测不同浓度曲古柳菌素（Trichostatin A,TSA）及烟酰胺（Nicotinamide,NAM）处理后,肝癌细胞中ALDH18A1的表达。3、用免疫共沉淀和Western blot等方法寻找ALDH18A1的乙酰化酶和去乙酰化酶。4、用质谱技术、位点突变确定肝癌细胞中ALDH18A1的主要功能性乙酰化位点。5、用转染、CCK8、细胞划痕和Transwell等方法,检测敲低去乙酰化酶SIRT2对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果1、与对照组相比,敲低ALDH18A1后,肝癌细胞增殖和迁移能力降低,细胞凋亡增加。2、NAM处理后,肝癌细胞中ALDH18A1的表达水平上调。3、CO-IP和WB结果表明,乙酰化酶CBP和去乙酰化酶SIRT2与ALDH18A1存在相互作用,敲低SIRT2或过表达乙酰化酶CBP均可增加ALDH18A1的乙酰化水平。4、与ALDH18A1野生型相比,其K311、K347位点KR突变后,ALDH18A1乙酰化水平降低;KQ突变后,ALDH18A1乙酰化水平增加;K311/347双位点KR突变后,ALDH18A1乙酰化水平降低更为明显。5、与对照组相比,敲低SIRT2后,肝癌细胞增殖和迁移能力降低,细胞凋亡增加。结论敲低ALDH18A1抑制肝癌细胞的增殖和迁移,促进肝癌细胞凋亡。SIRT2介导的ALDH18A1在K311和K347位点去乙酰化,促进肝癌细胞的增殖和迁移,抑制肝癌细胞凋亡。
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