论文部分内容阅读
目的: 重楼是百合科植物云南重楼或七叶一枝花的干燥根茎，具有清热解毒，消肿止痛等功效。本研究将考察重楼皂苷Ⅱ对乳腺癌细胞生长、细胞凋亡和细胞自噬的影响，并探讨重楼皂苷Ⅱ促凋亡和诱导自噬的作用机制，为重楼皂苷Ⅱ的临床研究提供实验基础。 方法: 1.采用MTT法，研究重楼皂苷Ⅱ对体外培养的8种人肿瘤细胞增殖的影响，来筛选出细胞瘤株模型。 2.通过western blot、qPCR，研究重楼皂苷Ⅱ对人乳腺癌细胞细胞凋亡的影响。采用流式细胞周期分析，研究重楼皂苷Ⅱ对人乳腺癌细胞细胞周期的影响及机制研究。 3.通过免疫荧光、电镜、western blot、qPCR，研究重楼皂苷Ⅱ对人乳腺癌细胞细胞自噬的影响。 4.通过裸鼠动物体实验，研究重楼皂苷Ⅱ对SUM-149人乳腺癌细胞在体内生长的影响。 结果: 1.MTT法分析显示，重楼皂苷Ⅱ对体外培养的多种人肿瘤细胞增殖具有显著的抑制作用。 2.重楼皂苷Ⅱ对人乳腺癌细胞MCF-7、SUM-149具有抑制细胞生长和促进细胞凋亡的作用;但没有细胞周期阻滞作用。 3.重楼皂苷Ⅱ诱导人乳腺癌细胞MCF-7、SUM-149自噬小体生成，增加自噬溶酶体融合，促进自噬降解。 4.重楼皂苷Ⅱ促进人乳腺癌细胞MCF-7、SUM-149肿瘤凋亡，降低ERK的磷酸化，激活caspase家族蛋白活性，促进线粒体凋亡途径，同时可以激活AMPK/mTOR途径，直接作用在CTSB上，诱导自噬。 5.裸鼠动物实验表明重楼皂苷Ⅱ对SUM-149人乳腺癌细胞在动物体内生长有显著的抑制作用。 结论: 重楼皂苷Ⅱ显著抑制人乳腺癌细胞生长，诱导细胞调亡，同时具有增加自噬溶酶体融合，促进自噬降解作用。重楼皂苷Ⅱ还抑制小鼠移植瘤的生长。重楼皂苷Ⅱ直接作用在CTSB上，激活AMPK/mTOR途径促进自噬可能为重楼皂苷Ⅱ的部分作用机制。我们的结果表明重楼皂苷Ⅱ可能为重楼抗肿瘤药效活性成分之一。