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目的观察针刺眶内与眶外腧穴对视神经损害细胞凋亡干预以及神经保护作用,验证眶内腧穴选择的必要性,提升针刺治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变的科学内涵。方法1、非动脉炎性前部缺血性视神经病变(Non-arteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy,NAION)兔眼模型制备用随机数字表法将3只新西兰大耳白兔随机分为3组,每组1只。右眼为实验眼。以孟加拉玫瑰红为光敏剂,采用波长532nm,功率75mW,光斑直径1000um的绿光诱导兔眼NAION模型。按照不同分组,分别予以照射40s、60s、80s。造模结束后1天,通过裂隙灯、FFA检查,对造模进行简要评价。2、针刺模型制备选取新西兰白兔20只,以右眼为实验眼。以孟加拉玫瑰红为光敏剂,采用波长532nm,功率75mW,光斑直径1000um的绿光诱导兔眼非动脉炎性前部缺血性视神经病变模型。同样采用随机数字表法将20只新西兰大耳兔随机分为四组,每组5只:模型组、眶内针组、眶外针组、眶内+眶外针组,再随机选取5只左眼组成空白对照组,眶内针刺组针刺腧穴选取睛明、承泣、球后,眶外针刺组腧穴选取攒竹、鱼腰、窍明,眶内加眶外针刺组腧穴即为以上两组之和。造模成功后一天,三个针刺组开始针刺干预,每日1次,每次留针30min,连续治疗3天,模型组与正常组不做处理。治疗结束后,进行凋亡指标检测。所有动物处死获取眼后节标本,制作石蜡切片,分别进行TUNEL免疫荧光检测,并人工计数细胞凋亡、免疫组化染色检测Caspase-3及active Caspase-3表达,用Image Pro Plus 6.0图像对图片进行积分光密度半定量分析。结果1、NAION兔眼模型制备:激光诱导孟加拉玫瑰红光敏剂(Rose Bengal,RB)制备兔眼NAION动物模型,在同一激光参数条件下,不同激光照射时间40s、60s、80s造模成功后,由裂隙灯检查可以看出,三种不同激光照射时间皆可出现视盘上半水肿,边界不清,荧光素眼底血管造影(fluorescein fundus angiography,FFA)均能出现早期视盘低荧光,晚期高荧光或背景荧光增强,甚至出现荧光渗漏,40s病变较轻,而80s较重,早期即出现荧光渗漏。以60s为最终NAION模型制备参数。2、TUNEL细胞凋亡计数:(1)模型组与正常组及三个针刺组相比,P=0.000<0.01,均有显著统计学差异,模型组细胞凋亡数高于正常组及三个针刺组;(2)眶内+眶外针刺组与正常组相比无统计学差异(P=0.225>0.05),而两组细胞凋亡计数均值显示:正常组<眶内+眶外针刺组。眶外针刺组与眶内针刺组分别与正常组相比,眶外针组(P=0.015<0.05),眶内针组(P=0.045<0.05)均有统计学差异,正常组细胞凋亡数均低于眶外针刺组与眶内针刺组;(3)细胞凋亡计数均值显示:眶内+眶外针刺组<眶内针刺组<眶外针刺组,三个针刺组之间两两比较P>0.05无统计学差异。3、Caspase-3阳性表达结果:(1)模型组与正常组及三个针刺组相比,P>0.05,均无统计学差异;(2)正常组与三个针刺组相比,P>0.05,均无统计学差异;(3)三个针刺组之间两两比较P>0.05无统计学差异。4、active Caspase-3阳性表达结果:(1)模型组与正常组及眶内+眶外针刺组相比,P<0.01,有显著统计学差异,模型组与眶内针刺组相比P<0.05,有统计学差异,模型组active Caspase-3表达均高于正常组、眶内+眶外针刺组及眶内针刺组。模型组与眶外针刺组相比P>0.05,无统计学差异,两者均值相比模型组>眶外针刺组;(2)正常组与三个针刺组相比,P<0.01,有显著统计学差异,正常组active Caspase-3表达均低于三个针刺组;(3)三个针刺组之间两两比较,眶内针刺组与眶外针刺组及眶内+眶外针刺组相比,P>0.05无统计学差异,三者均值相比眶外针刺组>眶内针刺组>眶内+眶外针刺组;眶外针刺组与眶内+眶外针刺组相比,P=0.027<0.05,有统计学差异。结论1、光动力法诱导NAION动物模型,在同一激光参数条件下,不同激光照射时间40s、60s、80s均能成功制备兔眼NAION动物模型,40s病变较轻,而80s病变较重。60s照射时间制备模型效果较好,为以后兔眼NAION相关实验研究提供造模依据。2、针刺对凋亡因子Caspase-3的干预作用有待于扩大样本量进一步明确,针刺可以通过下调Caspase-3其下游的活性片段active Caspase-3发挥其抗凋亡作用。而从不同选穴对降低active Caspase-3的表达来看,眶内+眶外针刺组效果最为显著。3、针刺干预NAION,可以起到抗细胞凋亡的作用,且眶内+眶外针刺组效果最为显著,说明眶内与眶外针刺联合后,对视神经凋亡损害的抑制作用更强,提示临床上使用该眶内加眶外的选穴方法更利于疾病的恢复。