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目的:IKCal基因在宫颈癌中呈高表达,影响宫颈癌Hela细胞的增殖和凋亡[1]。本实验的主要目的是通过生物信息学在线软件对IKCa1基因进行miRNA预测,探讨候选miRNA在转录后水平对IKCa1基因的调控作用,并检测候选miRNA过表达后对宫颈癌Hela细胞增殖活性的影响。方法:1.利用生物信息学在线软件starBase V2.0进行IKCa1基因上游miRNA预测,通过文献查阅,并选定其中一个作为研究对象。2.为了检验候选miRNA能否直接作用于IKCa1 mRNA3’UTR,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测候选的miRNA与IKCa1 mRNA3’-UTR相互作用对荧光素酶活性的影响。3.确认候选miRNA能够靶向调控IKCa1基因后,对Hela细胞进行转染,应用PCR技术和Western bolt法检测IKCa1mRNA和蛋白表达水平,检验候选miRNA在转录后水平对IKCa1基因表达的影响。4.采用CCK-8法检测候选miRNA对Hela细胞增殖活性的影响。结果:1.在生物信息学软件starBase V2.0所预测的miRNAs中,通过文献查阅后,选定miR-497-5p作为研究对象进行后续实验。2.双荧光素酶报告基因检测系统的检测结果显示miR-497-5p mimics和IKCa1-wt共转染组Hela细胞的荧光素酶活性显著降低。3. PCR结果显示转染miR-497-5p mimics的Hela细胞中IKCa1 mRNA表达明显下降,Western bolt结果显示转染miR-497-5p mimics的Hela细胞中IKCa1蛋白显著下降。4.CCK-8实验结果显示转染miR-497-5p mimics后Hela细胞的增殖活性明显下降。结论:1.通过starBase V2.0预测及文献查阅,确定miR-497-5p为研究对象;在Hela细胞中分别转染 IKCa1-wt、IKCa1-mut 及 miR-497-5p mimic 或 miR-497-5p mimicNC,经双荧光素酶报告基因系统验证,证实miR-497-5p能够靶向调控IKCa1基因表达。2.在Hela细胞中转染miR-497-5p,应用PCR及Western blot检测IKCa1 mRNA和蛋白的表达情况,结果显示miR-497-5p能抑制IKCa1 mRNA和蛋白的表达,进一步证实miR-497-5p能够靶向调控IKCa1基因表达。3.在Hela细胞中转染miR-497-5p,采用CCK-8实验检测Hela细胞的增殖情况,表明miR-497-5p能抑制Hela细胞增殖。4.本实验研究鉴定了 miR-497-5p能够靶向调控IKCa1,表明miR-497-5p表达下调可能是宫颈癌中IKCa1基因高表达的机制;且miR-497-5p能抑制宫颈癌Hela细胞增殖,可能与miR-497-5p抑制IKCa1表达相关,有利于探索宫颈癌发病的可能分子机制。