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EB病毒相关胃癌(Epstein-Barr virus-associated gastric carcinoma,EBVaGC)是胃癌的一种常见亚型,EBVaGC在胃癌患者中的构成比大约10%。越来越多的证据表明消化道肿瘤患者的肠道微生物群与患者的预后存在着密切的关联。我们的目的是建立一种基于以EBV感染为分类,通过胃腺癌患者“肠道微生物-胃癌标志物-临床预后”的思路,建立包括肠道微生物群功能影响,结合胃癌相关免疫微环境和脂质代谢生物标记物的生存预测模型。我们收集到了介于肿瘤切除后和化疗间期的10例(EBVaGC=4,EBVnGC=6)胃腺癌患者的新鲜粪便样本,利用16S rRNA扩增子测序方法对其肠道菌群进行检测并分析。收集540例经福尔马林固定石蜡包埋(Formalin fixed paraffin-embedded,FFPE)的胃腺癌病例组织切除标本制作组织芯片,采用免疫组化方法检测上述菌群影响宿主差异功能的标记蛋白表达情况。建立机器学习模型,利用最小绝对收缩和选择算子算法(Least absolute shrinkage and selection operator,LASSO),采用LASSO-Cox回归应用于筛选高度准确的标记蛋白,筛选的结果再使用LASSO-Logistic回归构建标记患者预后的预测分数复合评分的模型。实验室构建EBV感染的胃癌细胞系,利用RNA-seq测序分析EBV阳性胃癌细胞系与EBV阴性胃癌细胞系转录组差异表达的基因,并对EBV阳性胃癌系高表达的差异基因进行功能预测富集分析。采用Western blotting方法检测EBV阳性胃癌细胞系及EBV阴性胃癌细胞系中相关蛋白的表达情况。采用划痕实验检测胃癌细胞系的细胞迁移功能。16S RNA测序发现,EBVaGC的患者肠道菌群中存在着拟杆菌属的增加,Prevotella9属的减少,Lachnospiraceae、Bacteroidaceae和Ruminococcaceae科增加,Prevotellaceae科的减少。基于京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据的Tax4Fun分析表明,EBVnGC和EBVaGC之间存在差异表达的肿瘤通路,包括脂代谢、环境信息处理,细胞过程,生物系统等。胃癌细胞系的转录组分析中,EBV阳性的胃癌细胞系中细胞因子信号通路被激活,CXCL12上调表达。细胞系的Western blotting检测和组织芯片的免疫组化检测分别提示,CXCL12与ACOT1和GLI3蛋白表达具有同向的关系,CXCL12可能存在激活了Hedgehog信号通路,ACOT1和GLI3高表达的胃腺癌患者提示预后更差。LASSO-Cox模型筛选出了14种有显著性的免疫微环境和脂质代谢蛋白的标志物,使用LASSO-Logistic模型建立了由8种标记蛋白组成的复合评分预测模型。在构建的训练集(378例)中,EBVaGC亚组与EBVnGC亚组,高复合评分组与低复合评分组之间的生存率存在显着差异。多因素回归分析显示,复合评分是一个独立的预后因素(OR=2.26,95%CI:2.28-3.36)。在验证集(162例)和全集(540例)两个分组中也证实了复合评分的预后价值。我们的研究表明复合评分是包括评估EBVaGC和EBVnGC的胃癌患者生存率有重要意义的生物标志物。我们的研究表明EBVaGC与EBVnGC患者的肠道微生物表达的差异,对宿主患者的免疫与脂质代谢的生物学作用是影响患者预后的因素。根据免疫与脂质代谢生物标志物建立的预后模型对患者的预后预测有重要作用。