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背景:糖尿病血管并发症的发生会大大提高糖尿病病人的残疾率和死亡率。研究证实糖尿病血管病变的实质为一种炎症反应,在炎症反应的最初阶段会发生单核细胞与内皮细胞黏附功能的异常。目前认为内皮细胞黏附以及分泌作用的异常为血管炎症病变始动因素,在糖尿病血管并发症中起了关键性的作用。大黄酸(Rhein)是从中药大黄中分离出来的一种分子量为284g/mol的单体组分,其结构明确,提取方法成熟,具有减轻炎症反应,杀伤肿瘤细胞,抑制氧化应激等药理活性。近几年有研究证实在糖尿病肾病的早期阶段,大黄酸可以通过抑制糖尿病肾病病人肾小球毛细血管内皮细胞的增生,改善肾小球的滤过,抑制炎症反应,起到保护肾脏的作用。而关于大黄酸对血管内皮细胞黏附及分泌作用的影响却鲜有讨论。本研究从动物实验、细胞实验两个方面进行,通过对相关黏附蛋白及血管活性物质的检测,来探讨大黄酸对血管内皮细胞黏附及分泌功能的影响。方法:1、动物实验:1.1共挑选14只4周龄大小的db/db小鼠,将其随机分为2组,分别为大黄酸组和db/db对照组,各7只,分别予8周的大黄酸(1%纤维素钠溶液溶解)100mg/(kg·d)和1%纤维素钠溶液灌胃。另选7只同周龄的的C57BL/KsJ-db/m小鼠予1%纤维素钠灌胃作为db/m组。1.2每周观测小鼠各生理活动,并记录小鼠的各项生理指标,包括体重、血糖;8周后处死小鼠,取血清,运用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中可溶性ICAM-1、VCAM-1、ET-1的浓度,运用硝酸盐还原酶实验测定血清NO浓度;免疫组化法测定小鼠胸主动脉表面ICAM-1、VCAM-1表达情况;RT-PCR技术检测小鼠胸主动脉ICAM-1、VCAM-1、ET-1、eNOS mRNA表达。2、细胞实验:2.1将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为正常对照(Control)组、单纯TNF-α 40ng/ml刺激(TNF-α)组、大黄酸100ug/ml+TNF-α 40ng/ml (Rhein100)组、大黄酸50ug/ml+TNF-α 40ng/ml (Rhein50)组、大黄酸10ug/ml+TNF-α 40ng/ml (Rhein10)组。向培养的细胞中分别加入上述浓度的大黄酸(Rhein)处理24h后,再分别加入40ng/ml的TNF-α处理6小时。2.2采用Western印迹法检测和RT-PCR技术分别检测细胞间粘附因-1 (ICAM-1的表达水平;通过检测黏附的单核细胞株THP-1数目来判断内皮黏附功能的变化。结果:1、动物实验:1.1免疫组化结果:与db/db阴性对照组相比,大黄酸可以抑制小鼠大动脉表面黏附蛋白ICAM-1、VCAM-1表达(P<0.05)。1.2 RT-PCR结果:与db/db阴性对照组相比,大黄酸可以明显抑制ICAM-1、VCAM-1以及ET-1 mRNA的表达,提高eNOS的表达(P<0.05)。1.3酶联免疫吸附(ELISA)及硝酸盐还原酶实验:与db/db阴性组相比,大黄酸可以抑制血清sICAM-1、sVCAM-1的表达(P<0.05),提高血清中NO的浓度(P<0.05),但对ET-1的表达无影响(P>0.05)。2、细胞实验:2.1实时定量PCR和Western印迹的结果:与TNF-α对照组相比,经10ug/ml、 50ug/ml、100ug/ml大黄酸处理的HUVECs表面ICAM-1蛋白表达水平均下降(P<0.05); 经 50ug/ml、100ug/ml大黄酸处理的HUVECs的ICAM-1 mRNA的水平明显下降(P<0.05)。2.2黏附性实验结果:经100ug/ml大黄酸处理的HUVECs所黏附的单核细胞个数显著减少(P<0.05)。结论:1、大黄酸可以抑制糖尿病小鼠ICAM-1、VCAM-1、ET-1蛋白和mRNA的水平,升高eNOS mRNA的表达;能够提高血清NO的浓度,抑制血清sICAM-1、sVCAM-1及胸主动脉ICAM-1、VCAM-1的表达。2、细胞实验中大黄酸能够抑制HUVECs中ICAM-1的表达。3、大黄酸能够调节黏附蛋白的表达,改善血管内皮细胞活性物质的分泌,减轻血管炎症病变,研究结果能够给大黄酸治疗糖尿病血管病变开辟新的理论基础。