银杏叶中银杏内酯B的提取、分离与纯化研究

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银杏是我国特有的林源植物,资源拥有量占世界总量的70%以上,主要分布在辽宁、安徽、广西、四川、湖北、湖南、江苏、浙江等省区,其叶、果实、种子均有较高的应用价值。银杏的化学成分较为复杂,银杏叶中已有报导的化学成分多达180种,其中主要活性成分为萜内酯化合物和黄酮类化合物。萜内酯类化合物包括银杏内酯A、B、C、J和M,均为血小板活化因子拮抗剂,其中银杏内酯B的活性最强,药效优于总内酯,价格也远远高于总内酯,在医药、食品等行业受到广泛重视。本文对银杏内酯B的初步检测方法做了研究,探讨了紫外分光光度法、薄层色谱法和显色法的可行性,并比较了三种方法的优劣。最终确定紫外分光光法作为银杏内酯B粗提物的检测方法,该方法检测快速,操作简便,效果稳定,重现性较好。本文对不同季节采摘的银杏叶中银杏内酯B的含量进行了分离研究,结果表明以10月下旬采摘的银杏叶中银杏内酯B的含量最高。比较了四种溶剂的提取效果,最终选择乙醇作为溶剂。用乙醇粗提银杏叶中银杏内酯B,设计正交实验,确定最佳工艺。研究表明,当料液比(加醇量)1:24g/ml,提取次数3次,提取时间2.5小时,乙醇浓度70%时,效果最佳,粗提得率达到0.8912%。影响银杏内酯B粗提率的主要因素的显著性顺序为:料液比>提取次数>乙醇浓度>提取时间。选择大孔树脂对银杏内酯粗提物进行初步纯化。论文考察了不同类型树脂对银杏内酯B的纯化效果。选择四类大孔树脂(分别为酸性、碱性、阴离子、阳离子)进行树脂的吸附与解吸效果研究。结果表明,AB-8弱极性树脂纯化效果最好。最佳动态吸附条件为:吸附流速2BV/h,洗脱流速2BV/h,浓度60%甲醇洗脱,洗脱体积5BV。最佳工艺条件下银杏内酯B的纯度为:77.54%。采用层析法精制银杏内酯B,考察了不同流动相对精制结果的影响。最终以甲醇:水为2:8作为流动相时,分离效果较理想。HPLC最终测定,经树脂纯化后的银杏内酯B纯度为72.70%,经制备型高效液相色谱精制得到的银杏内酯B纯度为96.72%,产品最终得率为0.7297%。
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