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miRNA是广泛存在于真核生物中长度为20-24 nt的内生单链非编码RNA,具有高度的保守性。miRNA在植物生长发育,胁迫防御,脂肪代谢,器官形成等生理代谢与个体发育中起着重要的作用。miRNA通过与靶mRNA的特异性结合,对靶mRNA的翻译起抑制作用或者直接引起靶mRNA的降解,进而对基因的表达进行转录后的调控。植物中保守miRNA作用的靶基因主要是一些与植物生长发育相关的转录因子或调控因子。MYB因子作为一类重要的转录因子,在植物器官的形态建成,次生代谢,抗逆胁迫,激素应答等多个方面起着重要的作用。很多MYB因子都是miRNA的靶标。随着越来越多的miRNA和MYB因子在不同的物种中被鉴定出来,具体的功能鉴定将成为主要的研究方向。
本论文重点研究了miR858以及一个靶基因AtMYB20。构建了MIR858、AtMYB20、m5AtMYB20以及MIM858的过表达载体,并通过农杆菌介导的蘸花法将它们分别转入野生型拟南芥(Col)中,得到了相应的转基因植株T2代。为进一步鉴定miR858的功能奠定了基础。同时通过对不同转基因植株中AtMYB20的表达分析,证明了miR858与AtMYB20的负调控关系。
另外,本实验构建了 pMIR858∷GUS及pAtMYB20∷GUS的表达载体,并成功转入野生型拟南芥中,得到了转基因植株。通过对转基因植株进行GUS定位分析,发现miR858与AtMYB20的表达位置基本相同。表达分析表明,两者从幼苗发育初期就开始表达,而且表达位置广泛。在叶脉,荚,茎,根中均发现了基因的表达。暗示着miR858与AtMYB20可能对植物的生长或物质的运输起着重要的作用。