论文部分内容阅读
目的:利用氟病区煤烘玉米建立燃煤型氟斑牙大鼠模型,观察SD大鼠食用含氟煤烘玉米后牙齿成釉细胞形态发生的改变,以及氟对大鼠牙齿发育过程中凋亡抑制基因Bcl-2、Bax在成釉细胞中表达的影响,探讨燃煤型氟斑牙发生的分子机制和预防控制措施。方法:该实验包括两部分:实验一燃煤型氟斑牙动物模型的建立1、动物的选择、分组及饲养:50只3周龄的SD大鼠,雌雄各半,随机分为5组,每组10只,雌雄各5只,分笼喂养,每12小时明暗交替,自由饮食,分别为:①高氟组:饲以含氟量为88mg/kg的玉米,配以面粉、豆粉、鱼粉、骨粉、麦麸和食盐;②中氟组:饲以含氟量为56mg/kg的玉米,配以面粉、豆粉、鱼粉、骨粉、麦麸和食盐;③低氟组:饲以含氟量为30mg/kg的玉米,配以面粉、豆粉、鱼粉、骨粉、麦麸和食盐;④阳性对照组:给予饮用100mg/L的氟化钠水溶液,配料成分中玉米为不含氟的玉米,配以面粉、豆粉、鱼粉、骨粉、麦麸和食盐;⑤阴性对照组:饮用水中含氟量为0.08ppm,饲料配方中不含氟。2、观察指标及方法①实验开始时和每周后分别称量体重,观察大鼠一般情况,记录体重变化。②在一月末和三月末分别进行尿样和血样采集,用氟离子选择电极法测定尿液和血清中氟离子的含量。③在一月末及三月末检查氟斑牙的发生情况,根据氟斑牙分级标准对各组大鼠氟斑牙进行记分,并在实验前后用游标卡尺测量牙齿长度。④当观察到大鼠牙齿出现明显的氟斑牙时即处死取材,取出牙齿和下颌骨。常规制作石蜡切片,HE染色,观察大鼠成釉细胞和成牙本质细胞的形态学改变。采用免疫组化方法,观察成釉细胞中相关凋亡基因Bcl-2及Bax的表达。在光学显微镜下,将切片的数字化图像输入多媒体分析系统,把阳性表达的强度转化为数字信号,对免疫组化的阳性区域的染色强度进行半定量分析,每例随机选取6个视野,测定Bcl-2及Bax免疫组化光密度值,取均值作为测量值。结果:1、大鼠的一般情况及体重变化:阴性对照组的大鼠被毛光滑,有光泽,反应灵敏,实验组的大鼠被毛失去光泽,反应迟钝,阴性对照组大鼠体重增加较实验组明显,差异有显著性(P＜0.05)。2、实验组大鼠血氟、尿氟水平在三月末均高于一月末,差异有显著性(P＜0.01);实验组大鼠血氟、尿氟同期水平为高氟组＞中氟组＞低氟组＞阴性对照组,两两比较,差异有显著性(P＜0.01)。3、模型复制3个月后肉眼观察到阴性对照组大鼠的牙齿呈半透明棕黄色,光滑而有光泽,实验组大鼠牙齿由棕黄色转变为淡黄色,部分区域有白垩色不透光改变,甚至出现白色条纹或斑点,继而形成白色斑块。严重者出现釉质缺损,牙齿长度磨损变短的现象。4、漠型大鼠氟斑牙记分:随着染氟时间的延长和染氟剂量的增加,实验组大鼠牙齿大部分棕色横纹消失,整个牙面呈白粉笔样,大多伴有牙体缺损;高氟组记分为3级的数量最多,达到8例,中氟组、低氟组、阳性对照组依次减少,阳性对照组仅3例,阴性对照组记分均为0级;高氟组、中氟组与低氟组和对照组比较,差异有显著性(P＜0.01)。5、牙齿长度测量:实验组大鼠牙齿长度在三月末明显短于一月末,染氟组与阴性对照组比较有显著性差异(P＜0.01),高氟组牙齿长度最短,与各组比较均有显著性差异(P＜0.05)。6、HE染色结果:阴性对照组大鼠切牙从根端向切端,成釉细胞由卵圆形逐渐向高柱状分化,成熟的成釉细胞成高柱状,排列均匀一致,釉质成熟期后成釉细胞逐渐由高柱状向矮立方状转化,成牙本质细胞排列整齐呈栅栏状,牙本质均匀一致,其间可见牙本质小管,牙髓细胞分布均匀;低氟组成釉细胞排列不规则,原有的高柱状结构变矮,少量细胞发生扭曲,成牙本质细胞排列紊乱;高氟组成釉细胞排列极不规则,大量细胞扭曲,釉质变薄。7、Bcl-2及Bax的表达:实验组Bcl-2及Bax在成釉细胞、成牙本质细胞及牙髓细胞中均有表达,定位于细胞胞浆和胞核的核膜,呈棕黄色颗粒,各实验组的表达部位基本相同,高氟组表达最弱,阴性对照组表达最强。经半定量分析比较,染氟组和阴性对照组差异有显著性(P＜0.01)。染氟组之间仅高氟组和中氟组之间差异有显著性(P＜0.05)。结论:1、成功建立了燃煤型氟斑牙大鼠模型。2、随着染氟时间的延长和染氟剂量的增加,大鼠氟斑牙的严重程度也随着增加。3、过量的氟可导致大鼠成釉细胞由原有的高柱状向矮立方转化,发生排列紊乱、扭曲等形态改变。4、过量的氟对大鼠成秞细胞Bcl-2及Bax蛋白的表达有抑制作用,推测其可能诱导了成釉细胞凋亡,从而影响牙釉质发育,并最终导致牙齿的发育异常。5、