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目的: 人葡萄球菌是引起血流感染的重要病原菌,分离率逐年增高,耐药性强、易产生物被膜,临床治疗十分棘手,引起医学界广泛关注。本文旨在通过研究血液来源人葡萄球菌生物被膜形成能力、耐药性特点,分析psm-mec基因与生物被膜形成能力和耐药性之间的相关性,为人葡萄球菌感染的防治提供依据。 方法: 1.收集血液来源经全自动微生物分析系统鉴定的人葡萄球菌。 2.采用琼脂稀释法检测血液来源人葡萄球菌对16种抗菌药物的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC),通过PCR扩增mecA基因准确验证和区分耐甲氧西林人葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcushominis,MRSHo)和甲氧西林敏感人葡萄球菌(methicillin-susceptiveStaphylococcus hominis,MSSHo),比较二者在耐药谱上的差异。 3.半定量粘附实验(Microtite Plate Assay, TCP)检测血液来源人葡萄球菌生物被膜形成能力,分析生物被膜组与非生物被膜组菌株在耐药谱上的差异。 4.PCR初筛携带psm-mec基因菌株,扩增fudoh基因和DNA测序验证psm-mec检测结果,分析psm-mec基因与生物被膜形成能力和耐药性之间的相关性。 5.PCR扩增mecR1/psm-mec与psm-mec/xylR基因间隔序列,探究psm-mec基因在SCCmec上的定位特点。 6.多重PCR法对携带psm-mec基因菌株SCCmec分型,了解其SCCmec的分型情况。 7.采用多重PCR分别检测携带psm-mec基因菌株的mec与ccr型别,分析其SCCmec的构成特点。 结果: 1.收集血液来源人葡萄球菌共55株。 2.药敏试验显示,55株血液来源人葡萄球菌对利奈唑胺、呋喃妥因、普丁/达福、万古霉素和替加环素五种抗菌药物全部敏感,对苯唑西林、青霉素、红霉素、复方新诺明、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、四环素、利福平和庆大霉素的耐药率分别为85.45%、92.73%、87.27%、65.45%、67.27%、47.27%、47.27%、34.55%、41.82%、16.36%和10.91%。 3.55株血液来源人葡萄球菌中,46(83.64%)株为MRSHo,其中45株mecA基因阳性,1株阴性,其余9(16.36%)株为MSSHo,均未检出mecA基因。MRSHo对环丙沙星、左旋氧氟沙星、莫西沙星、青霉素、四环素和复方新诺明六种抗菌药物的耐药率高于MSSHo,差异具有统计学意义(P<0.05)。 4.TCP实验显示,55株血液来源人葡萄球菌中,生物被膜阳性35株,占63.6%,阴性20株,占36.4%。 5.生物被膜组细菌对16种抗菌药物的耐药率与非生物被膜组间不存在差异(P>0.05)。 6.psm-mec基因在MRSHo中的检出率为39.13%(18/46),在MSSHo中未检出。18株psm-mec基因阳性的菌株均扩增出fudoh,测序结果经Blast比对显示,均与psm-mec基因编码序列完全匹配。 7.携带psm-mec基因的人葡萄球菌产生物被膜率为83.33%(15/18),高于未携带psm-mec基因人葡萄球菌54.1%(20/37)的产生物被膜率,差异具有统计学意义(P<0.05)。分析fudoh基因测序结果发现,3株携带psm-mec未产生物被膜的菌株中,2株在psm-mec上游-12处单碱基突变(G>A)。携带psm-mec基因菌株较未携带psm-mec菌株更易对β-内酰胺类、四环素和复方新诺明耐药,差异具有统计学意义(P<0.05)。 8.所有18株psm-mec阳性菌株,mecR1/ psm-mec和psm-mec/xylR两段基因间隔序列扩增均阳性。 9.18株携带psm-mec基因的SCCmec型别检测显示,2(11.1%)株为典型SCCmecⅢ型(ⅢA,ⅢB各一株),16(88.9%)株无法分型,其中,4株为类ⅢA型(ⅢA-Tn554/orfX),3株为类ⅢB型(2株ⅢB+pls,1株ⅢB-IS431-Pub110),9株为SCCmec新型别。 10.携带psm-mec基因菌株的mec与ccr型别检测显示,18株菌株均为Class Amec;11株扩增出ccr,其中6株为ccr type1,1株为ccr type1+2,2株为ccr type1+3,其余7株未扩增出ccr。 结论: 1.血液来源人葡萄球菌甲氧西林耐药率高,耐甲氧西林菌株易同时对环丙沙星、左旋氧氟沙星、莫西沙星、青霉素、四环素和复方新诺明耐药。 2.血液来源人葡萄球菌生物被膜能力形成强,生物被膜组细菌耐药谱与非生物被膜组间无差异。 3.定位于mecR1与xylR间的psm-mec基因广泛存在血液来源的SCCmecⅢ亚型、变异型和新型别人葡萄球菌中。 4.血液来源人葡萄球菌中,携带psm-mec基因的SCCmec元件具有多样性,其组成中,mec保守,均为ClassA类,而ccr高度变异。 5.在血液来源人葡萄球菌中,携带psm-mec基因较未携带psm-mec基因的菌株生物被膜形成能力更强,psm-mec基因与生物被膜的形成存在相关性,同时携带psm-mec基因的菌株更易对β-内酰胺类、四环素和复方新诺明耐药。