论文部分内容阅读
目的: 从血液生化、肝脏病理、胆汁酸转运体表达变化，以及肝脏胆汁酸的变化，初步探讨UDCA与TUDCA对ANIT所致肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasis，IC)模型小鼠肝损伤的加重/缓解作用，并探索其可能的机制。 方法: 1.本实验包括急性期给药和恢复期给药两部分。选取C57BL/6雄性小鼠，随机分为正常对照组(N)、模型对照组(M)、UDCA低剂量组(UL)、UDCA中剂量组(UM)、UDCA高剂量组(UH)及TUDCA组。按分组灌胃给药，UL、UM和UH组的给药剂量分别是25 mg/kg，50 mg/kg和100 mg/kg。TUDCA组的给药剂量分别为50 mg/kg（恢复期）和100 mg/kg(急性期)。 2.急性期为每天给UDCA/TUDCA1次，连续给药15天。于第12天给药4h后，M组及给药组小鼠单次灌胃给予50 mg/kg ANIT油溶液造模，给药体积均为10mL/kg。恢复期给药为第1天单次灌胃给予50 mg/kg ANIT油溶液造模，48 h后，给药UDCA/TUDCA，每天1次，连续给药7天，给药体积均为10 mL/kg。 3.对以下指标进行测定: (1)血生化实验。检测TBIL、TBA、ALT、AST和ALP水平;用化学发光试剂盒对MDA、LDH及SOD等氧化指标进行了测定; (2)肝组织病理观察。用肉眼、光镜及电镜观察肝脏病理变化; (3)胆汁酸含量检测。采用LC-MS/MS，测定小鼠肝脏中CA、CDCA、DCA、LCA、UDCA、α-MCA、β-MCA、TCA、TCDCA、TDCA、TLCA、TUDCA、GCA、GCDCA、GDCA、GUDCA等16种胆汁酸含量; (4)转运蛋白表达检测。采用qRT-PCR检测肝脏中AE2、BSEP及MRP2 mRNA的表达水平;采用Western blot检测肝脏中AE2(SLC4A2)和BSEP(ABCB11)蛋白的表达水平。 结果: 1.急性期给药实验结果: (1)M组小鼠与N组比较，肝脏布有白色坏死灶，光镜观察可见汇管区炎性细胞浸润及肝脏多处坏死灶，TBA、ALT、AST和ALP水平显著增加(P＜0.05)。给药组与M组比较，肝损伤情况更为严重，其中TU组肝脏被白色坏死灶覆盖，显示大面积的坏死区域，UM组的TBIL、ALT、AST、ALP、TBA水平增加最为显著。 (2)M组与给药组小鼠肝脏中TBA含量显著增加(P＜0.05)，其中TCA与β-MCA含量显著增加(P＜0.05)，以上变化均是UM组最为显著。UDCA与TUDCA给药组小鼠，CA与TDCA占TBA比例（占比）下降，β-MCA占比升高。 (3) PCR与WB结果显示，UDCA与TUDCA能促进BSEP的转录与表达。 2.恢复期给药实验结果: (1)M组小鼠肝脏散在白色坏死灶，光镜观察可见汇管区炎性细胞浸润及大面积的坏死灶，血生化检测也显示TBA与ALT水平显著增加(P＜0.05)。给药组的肝脏未见白色坏死灶，光镜观察到的坏死灶面积与数量明显减少，肝酶与N组比较也无显著差别。 (2)M组小鼠肝脏中TBA含量较N组显著增加(P＜0.05)，其中TCA含量及占比较N组增加显著。给药组TBA含量，与N组无显著差异;TCA与β-MCA含量及占比较M组显著减少(P＜0.05);UDCA与TUDCA含量及占比较N与M组显著增加，并随剂量增加而升高。 结论: 1.UDCA和TUDCA加重ANIT所致IC模型急性期的肝坏死，UDCA50 mg/kg剂量组最为严重。可能与UDCA和TUDCA给药能促进BSEP蛋白表达，增加胆汁酸分泌，加重梗阻的急性IC模型的胆管压力有关。 2.UDCA和TUDCA改善ANIT所致IC模型恢复期的肝坏死，可能与UDCA和TUDCA给药能促进BSEP蛋白表达后增加胆汁酸分泌，减少肝内胆汁酸淤积有关。