鸡ANXA2基因关键启动子区SNPs的鉴定及其与产蛋性状的关联分析

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Annexin A2(膜联蛋白A2,ANXA2)是一种多功能的钙离子依赖性膜磷脂结合蛋白家族A亚族的成员,该家族中的每个成员都有一个保守的羧基结构域。研究发现,ANXA2基因在开产鸡卵巢中的表达量显著高于未开产的鸡,ANXA2mRNA在高产蛋鸡品种中的表达量显著高于低产蛋鸡品种,且在等级卵泡膜细胞中高表达。表明ANXA2基因在鸡排卵过程中发挥作用。但关于鸡ANXA2基因的多态性及其与产蛋性状的关联性还不明确。  本研究通过直接PCR扩增和单克隆测序发现鸡ANXA2基因5′端关键调控区(-2861bp至-1394bp)在高低产蛋鸡品种间存在6个SNPs,分别为g.-2337GT>-、g.-2255C>T、g.-2248A>G、g.-2188A>G、g.-2169G>A、g.-2160A>C。分析了六个多态位点在新杨褐、隐性白洛克鸡、文昌鸡和汶上芦花鸡四个品种中的群体分布特征,发现除新杨褐这一高度选育的商品鸡外,其它三个品种群体内的基因型分布符合哈代温伯格平衡定律。对隐性白洛克鸡(525只)群体的六个多态位点与产蛋性状的关联进行了分析,发现g.-2255位点与E32的相关性不显著(P=0.051),与AFE显著相关(P<0.05);g.-2188位点与这两个产蛋性状均显著相关;g.-2169位点与E32显著相关,与AFE极显著相关(P<0.01)。GG-2188基因型个体对应着更多的32周产蛋数(32.243个),GG-2169基因型个体对应着较早的开产日龄(155.577天)。  隐性白洛克鸡群体内连锁不平衡的三个SNPs构建的优势单倍型有CAA、TGG、CAG;纯合型CAA/CAA、TGG/TGG和杂合型CAA/TGG为优势双倍型。双倍型与产蛋性状关联分析发现双倍型TGG/TGG个体对应着更多32周产蛋数(32.16个);双倍型CAG/TGG个体对应着更早的开产日龄(155.43天)。推测对隐性白洛克鸡产蛋数和开产日龄起主要作用的是多态位点g.-2255、g.-2188和g.-2169。  以ANXA2启动子-2283bp至-1563bp区段的纯合野生型CAAGA/CAAGA的启动子质粒载体为模板,构建突变载体并转染至等级卵泡的膜细胞中,发现与野生型相比mut2-ANXA2能明显增强启动子活性。转录因子预测发现,g.-2255(T)处,可能结合转录因子BCL6;g.-2188(A)处,结合转录因子CREB;g.-2169(G)处,结合转录因子RXRF,当该位点突变成A后结合转录因子VTBP。  总之,本研究检测到鸡ANXA2基因启动子区的三个多态位点g.-2255C>T、g.-2188A>G、g.-2169G>A与产蛋性状相关联;T-2255会促进ANXA2基因的表达。这些结果为进一步研究ANXA2基因的功能奠定了基础,同时也为高产蛋鸡育种提供了有效的DNA分子标记。
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