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本文利用毛细管电泳技术对莱克多巴胺等四种β-激动剂在不同pH下的电迁移行为进行了研究,通过相关公式推导结合非线性拟合,获得了四种β-激动剂的离解常数。
通过EDF标记琥珀莱克多巴胺、FTC标记RAC-BSA及FITC直接标记RAC三种路线,研究、探讨了荧光标记RAC的有效方法。实验发现FITC直接标记RAC标记效率最高,操作步骤简便,引入杂质少,与抗体反应良好,竞争反应灵敏度高,适合在RAC荧光免疫快速检测方法中应用。
实验应用FITC标记RAC制得荧光标记抗原RAC-FITC,通过对标记抗原、抗体、反应时间、pH、竞争溶液体积、背景溶液中盐离子浓度及有机溶剂含量等方面研究、优化,最终建立了RAC荧光偏振快速检测方法,其LOD达到0.25ng/ml,检测范围在0.59-10.95 ng/ml,通过猪肉添加回收实验,测得回收率在70%以上。之后利用毛细管电泳技术,通过对缓冲液pH、缓冲液浓度、进样时间、分离电压及分离温度的优化,采用激光诱导荧光检测器,成功实现了RAC-FITC与其免疫复合物的分离,通过RAC竞争免疫反应,建立了CEIA检测方法,LOD达到达到0.2ng/ml,检测范围在2.6~6487.5ng/ml,通过猪肉添加回收实验,测得回收率在75%以上。
FPIA及CEIA两种方法为莱克多巴胺残留检测提供了新的快速、特异性检测方案,有效地提高了检测效率,降低了检测成本,同时为微流控芯片高通量检测RAC奠定了一定的基础。