目的:血吸虫感染后,虫卵诱导的多种炎性细胞的浸润改变了肝内正常的生理环境,形成由多种炎性细胞因子共同调节的具有促进星状细胞活化的肝内微环境。肝实质细胞在血吸虫肝纤维化形成中发生怎样的生物学功能的改变以及这种改变对血吸虫肝纤维化的形成有何影响还未受到人们的关注。本研究拟探讨血吸虫感染对肝细胞Wnt信号的影响及其对血吸虫肝纤维化的影响。方法:小鼠经皮肤感染25条日本血吸虫尾蝴。分离纯化正常及血吸虫感染6周和12周的小鼠肝脏实质细胞,Real-time PCR检测肝细胞Wnt信号相关分子(Wnt1、Wnt2、Wnt3、Wnt3a、Wnt5a、Fz1、Fz5、β-catenin、Sox9)、纤维化卡相关分子CTGF和TGF-β在mRNA水平的变化;Western blot检测肝细胞Wnt3/3a、β-catenin和Sox9在蛋白水平的变化;免疫组化检测肝组织Wnt3/3a、β-catenin和Sox9的表达。分别在血吸虫感染4周和6周后尾静脉注射携带了Wnt3amRNA和DKK1 mRNA的慢病毒Lv-Wnt3a-EGFP和Lv-DKK1-EGFP,两周后Masson染色观察各组小鼠肝脏纤维化的改变,Western blot和免疫组化检测Collagen α1、Desmin、α-SMA在肝脏的表达变化;Real-time PCR分析Lv-DKK1-EGFP处理后CTGF和TGF-β在肝组织和肝细胞中的基因表达。Western blot和免疫组化检测Lv-DKK1-EGFP处理后CTGF和TGF-β在肝细胞及肝组织中的表达。分离培养正常小鼠肝星状细胞,分别与来自正常鼠、血吸虫感染鼠和Lv-DKK1-EGFP干预的血吸虫感染鼠的肝细胞共培养,Real-time PCR检测肝星状细胞Collagen α1、α-SMA、TGF-β、Axin2、Myc、Sox9、Twist1 在mRNA水平的变化,Western blot检测肝星状细胞Collagen α1、α-SMA、β-catenin在蛋白水平的变化。结果:血吸虫感染后,小鼠肝细胞中Wnt1、Wnt2、Wnt3、Wnt3a、Wnt5a、Fz1、Fz5、Sox9、CTGF和TGF-β在转录水平表达增加,而β-catenin在转录水平未见明显变化;β-catenin、Wnt3/3a和Sox9在蛋白水平表达增加。免疫组化染色发现感染小鼠肝脏虫卵肉芽肿周围高表达Wnt3/3a、Sox9和β-catenin。为进一步了解Wnt信号对肝纤维化的影响,我们在血吸虫感染4周或6周时,分别经尾静脉注射重组病毒颗粒Lv-Wnt3a-EGFP和Lv-DKK1-EGFP,2周后处死小鼠,检测发现Wnt3a的过表达致使小鼠肝纤维化的程度加重,肝组织Collagenα1、Desmin和α-SMA的表达增多;而DKK1在肝脏的过表达则明显减轻了肝纤维化的程度并伴有肝脏Collagen α1、Desnin和α-SMA的表达减少。DKK1抑制Wnt信号还导致肝脏和肝细胞中CTGF和TGF-β的表达降低。将原代肝星状细胞分别与正常小鼠、血吸虫感染小鼠及DKK1干预的感染小鼠来源的肝细胞共培养。结果发现,与感染小鼠的肝细胞共培养促进HSCs中Collagenα1、α-SMA、TGF-β、Axin2、Myc、Sox9 和 Twist1 在转录水平表达增加;α-SMA、TGF-β、β-catenin的蛋白水平变化与mRNA水平相对一致:而Lv-DKK1-EGFP干预的血吸虫感染鼠来源的肝细胞并无明显的促进肝星状细胞活化增强的效应。结论:血吸虫感染后肝细胞Wint信号配体、受体和下游分子在转录和蛋白表达水平上均有明显升高,表明血吸虫感染促进肝细胞中Wnt信号的活化,且肝细胞表达增加的Wnt分子可能是肝脏Wnt的重要来源,且是促进血吸虫纤维化的重要信号。血吸虫感染鼠来源的肝细胞在体外显著促进肝星状细胞的活化和胶原蛋白的表达也依赖Wnt信号的存在,说明肝细胞源性的Wnt分子对星状细胞活化有直接的促进作用。此外,Wnt信号被抑制下调了肝细胞中CTGF和TGF-β的表达,提示Wnt信号的活化促进CTGF和TGF-β的表达而促进血吸虫病肝纤维化的进程。