滩羊是宁夏特色肉毛兼用绵羊品种,但是,近年来由于宁夏种质资源保护工作相对滞后,滩羊存在产羔率低、纯种滩羊数量不断锐减和等现象。本研究拟利用屠宰场获取滩羊卵巢,对滩羊卵母细胞的体外成熟、孤雌激活、孤雌激活胚胎及重构胚的体外培养进行系统的研究。通过探讨滩羊卵母细胞在不同HMG、FSH、LH浓度和培养体系下卵母细胞的体外成熟的效果；分析化学激活离子霉素(Ionomycin)联合6-二氨基嘌呤(6-DMAP)与不同电激活参数对滩羊孤雌生殖胚胎发育的影响；并构建转Cherry标记基因滩羊成纤维细胞-卵母细胞重构胚；分析其在不同融合条件下的融合率、卵裂率、桑椹胚和囊胚率,为进一步研究宁夏滩羊克隆和推动我区滩羊育种和种质资源保护工作奠定基础。通过研究,获得了如下结果：1本研究选用组织块分离培养法,分离、纯化滩羊胎儿成纤维细胞。通过性别鉴定获得3株雄性胎儿来源的细胞,对其进行外源Cherry标记基因转染,获得稳定表达外源基因的成纤维细胞；对第5代、15代、25代滩羊胎儿成纤维细胞染色体计数核型分析发现没有染色体缺失。2本研究采用割卵法获取未成熟的卵母细胞,共采集9138个卵巢,培养27607个卵母细胞。在培养条件为38.5℃,5%CO2,饱和湿度下,成熟液含有TCM199+10mg/mL BSA+100X ITS+1.5μg/mL17β-E2+2.5mmol/mL谷氨酰胺+1mmol/L丙酮酸钠中添加两种激素FSH、LH浓度为200μg/mL和40μg/mL,第一种成熟液培养体系下,能够促进宁夏滩羊卵母细胞的体外成熟,成熟率为68.8%；在基础培养液TCM199+10mg/mL BSA+100×ITS+1.5μg/mL17β-E2+2.5mmol/mL谷氨酰胺+1mmol/L丙酮酸钠添加一种激素HMG浓度为0.1IU/mL第二种成熟液培养体系中同样能够促进宁夏滩羊卵母细胞的体外成熟,成熟率为69.6%。3本研究对1093个成熟卵母细胞进行电激活,得到在1600V/cm的激活条件最适宜激活电压条件下卵裂率最高为58.5%,获得卵裂率和囊胚率最高分别为58.5%和为19.5%；对5047个卵母细胞采用离子霉素联合6-DMAP激活处理滩羊卵母细胞,其卵裂率囊胚率分别为81.0%和26.2%；对347个卵母细胞采用电激活联合6-DMAP激活处理滩羊卵母细胞,其卵裂率囊胚率分别为74.1%和19.6%。研究选用离子霉素联合6-DMAP激活法效率最高激活法进行后续实验。在孤雌激活胚胎培养中mSOFaa培养液能使囊胚发育率达到25.0%优于M16和KSOM16.7%、15.8%更适合做滩羊成熟卵母细胞激活胚的培养液。4在电融合研究中,选择融合参数为1400V/cm-2000V/cm这一区间内都存在融合效果。电压在1800V/cm时融合率为58.3%,卵裂率、桑椹胚率最佳为高40.0%和21.4%。最终选定1800V/cm为最佳融合参数进行后续试验。试构建重构胚440个获得2个转Cherry重构胚。