论文部分内容阅读
目的:1、观察不同pH值EOW对临床分离的MRSA与MDR-PA的杀灭效果。2、以硅胶膜为载体,建立体外细菌生物被膜模型,明确体外生物被膜形成时间。3、观察不同pH值EOW对临床分离的MDR-PA与MRSA生物被膜杀灭效果。方法:1、收集临床分离的MDR-PA和MRSA各十株,制备合适浓度的菌悬液备用。根据不同pH值,将EOW分为三组,pH<3.0、pH在4.0-5.0之间和pH在6.0-7.0之间,对照组为苯扎溴铵组和生理盐水组。将制备好的菌悬液加入到以上不同的处理组,采用悬液杀菌实验,监测不同pH值EOW作用1 min、3 min和5 min对MDR-PA和MRSA的杀灭效果。通过活菌计数,比较各组杀菌率。2、建立生物被膜体外模型,将临床收集的MDR-PA和MRSA制成合适浓度的菌悬液备用。将硅胶膜进行高压蒸汽灭菌放入到24孔板中,加入菌悬液和培养液,培养1 d和3 d,用银染法和扫描电镜观察被膜形成情况。3、将制备好的生物被膜片加入到三组不同pH值的EOW中,分别作用5 min、10 min、20 min后,观察不同pH值EOW对MDR-PA和MRSA生物被膜的杀菌效果。用平板计数法进行活菌计数,计算杀菌率;并用扫描电镜观察作用前后各组被膜形态的变化;荧光显微镜观察作用前后被膜表面死菌量的变化,评估杀菌效果。结果:1、通过悬液杀菌实验,三组不同pH值EOW作用1 min,对MDR-PA的杀菌率分别为98.51%、99.53%、99.74%,作用3 min和5 min,杀菌率均达100%,三组差异无统计学意义(P>0.05)。而苯扎溴铵组对MDR-PA作用1 min、3 min、5 min杀菌率分别为,48.71%、70.75%、84.51%,与三组EOW组差异明显,有统计学意义(P<0.05);三组不同pH值EOW和苯扎溴铵对MRSA作用1 min、3 min、5 min杀菌率均为100%,差异无统计学意义(P>0.05)。2、培养1 d,银染法发现载体表面有散在的黑色斑点,扫描电镜显示硅胶膜表面有散在的菌落聚集,表明生物被膜未形成;培养3 d,银染法发现载体表面有片状黑色絮状物形成,扫描电镜显示载体表面已经形成片状的菌落聚集,表明生物被膜已经形成。3、生物被膜杀菌结果显示,三组不同pH值EOW对MDR-PA生物被膜,作用5 min和10 min杀菌率均达99%以上,作用20 min均达100%,差异均无统计学意义(P>0.05);对MRSA生物被膜作用5 min杀菌率均达99%以上,作用10 min和20min杀菌率均达99.99%以上,差异均无统计学意义(P>0.05)。4、扫描电镜在作用不同时间观察被膜形态变化,作用5min,细菌开始变皱,形态发生轻微变化,作用10 min,细菌皱折明显,个别细菌破裂,作用20 min发现大量细菌破裂。荧光染色结果显示,与对照组相比,作用5 min、10 min、20 min,死菌数量明显增多,且差异不明显,这与活菌计数一致。结论:1、三组不同pH值EOW对MDR-PA杀菌效果相同且均优于苯扎溴铵,对MRSA的杀菌效果与苯扎溴铵相同,但苯扎溴铵杀菌谱窄,推荐使用EOW。2、以硅胶膜为载体,培养3 d可以形成细菌生物被膜。3、三组不同pH值EOW对MDR-PA和MRSA生物被膜杀菌效果一致,而偏中性氧化电位水,无腐蚀性且能稳定有效氯,保证杀菌效果,推荐将NEW用于临床耐药菌感染或已形成生物被膜的创面、伤口等。