背景与目的:近年来,人们对肿瘤的研究逐步向分子领域延伸,以期通过基因治疗达到治愈肿瘤的目的。细胞凋亡调控的紊乱是肿瘤发生、发展的一个重要环节,其中凋亡抑制蛋白家族（Inhibitor of apoptosisproteins,IAPs）是一个研究热点。Survivin基因是IAPs中的一个新成员,具有抑制细胞凋亡和促进细胞增殖的活性,通过直接或间接抑制caspase3和caspase7活性等途径阻断各种刺激诱导的细胞凋亡。RNA干扰（RNAi）是当前应用在逆向遗传学研究中高效的基因沉默技术,能高效特异地阻断基因的表达。目前,有关siRNA沉默survivin基因对卵巢癌H08910PM细胞凋亡作用的研究还鲜有报道。本实验意在研究Survivin-shRNA对survivin的沉默效应在卵巢癌细胞H08910PM中的作用,为卵巢癌基因治疗奠定一定的基础。方法:研究对象为人卵巢癌H08910PM细胞株。（1）设计并构建针对survivin的siRNA真核表达质粒载体;（2）培养H08910PM细胞,以脂质体法转染细胞,设计空白对照组（Blank组）、阴性对照组（NC组,pGPU6-GFP-NC质粒转染细胞）、转染试剂对照组（MOCK组）、sur-shRNA组（pGPU6-GFP-survivin-shRNA质粒转染细胞）;（3）实时荧光定量PCR检测survivin mgAN表达水平;（4）流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况;（5）Western blot检测survivin蛋白的表达量。结果:（1）重组质粒表达载体pGPU6-GFP-survivin-shRNA经酶切、测序鉴定,证实插入载体目的基因片段大小与插入方向正确;（2）通过脂质体介导转染人卵巢癌H08910PM细胞,在荧光显微镜下观察到绿色荧光。（3）实时荧光定量PCR结果证实干扰组的HO-8910PM细胞在48h和72h survivin mRNA表达量下降了38%和57%,与blank组相比有统计学意义（P＜0.05）,48h到72h干扰片段的沉默效应呈增强趋势;（4）流式细胞术检测,细胞的转染率为52.26%,在48h和72h sur-shRNA组细胞凋亡率（30.78±0.68和38.47±0.84）高于Blank组（2.15±0.78和2.74±0.55）（P＜0.05）;NC组（2.87±0.81和3.67±0.29）,MOCK组（3.38±0.56和3.88±0.25）和Blank组比无差异（P＜0.05）:（5）PI单染流式细胞仪检测细胞周期结果证实sur-shRNA组细胞周期发生改变,转染后G₀/G₁期细胞数显著增加,与Blank组相比出现G₀/G₁期阻滞现象,G₀/G₁期升高而G₂/M期下降（P＜0.05）。（6）Western blot结果证实了转染pGPU6-GFP-survivin-shRNA的H08910PM细胞SUrvivin蛋白的量明显下调。结论:（1）针对survivin基因的pGPU6-GFP-survivin-shRNA表达载体构建成功。（2）针对survivin基因的shRNA可明显降低卵巢癌H08910PM细胞survivin基因mRNA及蛋白的表达。（3）针对survivin基因的shRNA可促进H08910PM细胞的凋亡,将细胞阻滞于G₀/G₁期。本实验构建的重组质粒能有效沉默survivn基因的表达,并能促进H08910PM细胞的凋亡和抑制细胞增殖,为卵巢癌基因治疗奠定了一定的基础。