论文部分内容阅读
沙门氏菌属肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是重要的人和动物病原体,包括两个种和六个亚种,已被鉴定出超过2600种不同的血清型。肠道沙门氏菌亚种（enterica）是造成鸟类和哺乳动物沙门氏菌病的主要病原体,其中,肠炎沙门氏菌（S.Enteritidis）、鼠伤寒沙门氏菌（S.Typhimurium）、鸡白痢沙门氏菌（S.Pullorum）和鸡伤寒沙门氏菌（S.Gallinarum）是引起家禽沙门氏菌病的四种主要沙门氏菌血清型。由于肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌具有广泛宿主,可通过食物链造成人类感染,是重要的人畜共患沙门氏菌血清型。而鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌是宿主适应性血清型,禽类是其唯一宿主,可感染鸡群并引起严重疾病,给家禽养殖业造成巨大损失。本研究从2013-2018年间在华中地区家禽养殖场采集的病死鸡与发病鸡的粪便、脑、肝和脾脏等样本中分离纯化出84株沙门氏菌。参照中华人民共和国农业行业动物沙门氏菌病诊断技术标准,运用沙门氏菌多重PCR检测方法在获得的沙门氏菌分离株中鉴定四种重要的家禽感染相关沙门氏菌血清型。即:肠炎沙门氏菌（S.Enteritidis）、鼠伤寒沙门氏菌（S.Typhimurium）、鸡白痢沙门氏菌（S.Pullorum）和鸡伤寒沙门氏菌（S.Gallinarum）。鉴定出鸡白痢沙门氏菌54株（64.3%）、鼠伤寒沙门氏菌11株（13.1%）、肠炎沙门氏菌14株（16.7%）以及其它血清型的沙门氏菌5株（5.9%）。血清型分析结果显示,鸡白痢沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌是近年来华中地区的家禽养殖场中流行率较高的沙门氏菌。其中,鸡白痢沙门氏菌在华中地区家禽中感染最为严重。这些结果为养禽业沙门氏菌病防治提供了重要参考。由于沙门氏菌对宿主的侵入和致病性由基因组中存在的毒力基因协同作用决定,本研究利用特异性引物对84株沙门氏菌分离株的27种毒力基因（sodC1、spvC、spvB、spiA、pagC、cdtB、msgA、invA、sipB、prgH、spaN、orgA、tolC、iroN、sitC、lpfC、sifA、sopB、sefA、pipA、ttrC、misL、siiE、mgtB、spi4D、shdA、sopE）进行PCR扩增,检测这27种毒力基因在华中地区鸡源沙门氏菌分离株的分布情况。结果显示,sodC1检出率98.8%、sefA检出率98.8%、sopE检出率96.4%,没有检出cdtB,其他毒力基因的检出率均为100%。根据毒力基因的分布差异对沙门氏菌分离株进行毒力基因分型,共得到4种不同的毒力基因型,并且,所有分离株中,有96.4%的沙门氏菌属于毒力基因1型,包含26个毒力基因,这些结果为进一步研究不同毒力基因型对沙门氏菌致病性的影响提供参考。沙门氏菌可通过水平基因转移获得新基因,从而扩大宿主范围。水平基因转移还为沙门氏菌提供了新的遗传因子,提高了细菌感染新宿主的能力。因此,沙门氏菌携带的毒力质粒和相关噬菌体基因与沙门氏菌致病性密切相关。本研究针对沙门氏菌噬菌体和毒力质粒相关的三种毒力基因（sodC1、spvB和spvC）建立了多重PCR同步检测方法,该方法对沙门氏菌基因组DNA的最低检测限度为10-1 ng/μL,可实现对这三种毒力基因在沙门氏菌中的快速检测,为致病性沙门氏菌的分子诊断奠定了基础。