大鼠附睾特异性基因Rat615特性研究

来源 :中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:abcd432110000
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本文是对我室克隆到的附睾特异性表达基因Rat615(Ces7),在现有数据的基础上对其性质和功能进行了进一步的研究。通过筛选大鼠附睾cDNA库,我获得了与猕猴ESC615基因同源的大鼠附睾特异性基因Rat615。Rat615基因转录本长度约2.2kb,开放阅读框含1728个碱基,编码575个氨基酸,其中包括N端29-30个氨基酸的信号肽。RAT615氨基酸组成上与羧基酯酶(CEs)有大约50-60%的同源性,RAT615氨基酸序列中包含羧基酯酶家族(丝氨酸水解酶)中所有的保守序列,与已发现的CES7家族成员具有超过70%的同源性。Rat615转录和表达具有组织专一性,Northern blot,Westem blot以及免疫组化的结果显示大鼠Rat615 mRNA和蛋白在附睾中特异性转录和表达,主要在附睾体尾部表达并分泌至附睾管腔中成为管腔液组分。阉割动物模型实验的结果显示Rat615mRNA呈不完全依赖雄激素的转录模式,在输精管结扎动物模型中显示Rat615表达还可能受到炎症因子的影响。在大鼠的发育过程中,Rat615 mRNA和蛋白在大鼠青春期附睾发育的过程中表达不断上升,在性成熟期表达水平维持较高水平,与此同时蛋白被大量分泌到附睾管腔液中。Rat615的表达模式和在大鼠发育的不同时期的变化暗示了其对大鼠性成熟后精子在附睾内的成熟和贮存具有重要的意义。为了能深入研究Rat615基因的功能,并为knock-out小鼠的表型分析做好准备,我又克隆了小鼠附睾特异性基因Mouse615的cDNA片段,初步分析了小鼠Mouse615的表达模式。为了研究Rat615基因在大鼠附睾中所起的功能,我在昆虫细胞真核表达系统中构建了重组杆状病毒病表达了RAT615重组蛋白,初步分析了重组蛋白的酶学特性,发现重组RAT615蛋白具有羧基酯酶活力并能水解胆固醇酯和胆碱酯。鉴于胆固醇和胆碱在精子成熟与功能上的重要作用,我推测Rat615可能参与了附睾中精子的成熟和贮存过程。
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