疣猴亚科相关毛色基因分析及川金丝猴SNP位点筛选

来源 :广西师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ai2009ni
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毛色作为动物一个十分重要的形态特征,其丰富的性状主要是由黑色素决定的。黑色素有真黑素和褐黑素两种类型。目前,国内外已有很多关于动物相关毛色基因的研究。疣猴亚科是灵长类猴科的两个亚科之一,主要分布在非洲和东南亚的森林中,其物种的毛色均有明显的特征,但是关于疣猴亚科物种毛色差异的研究暂未见有报道。本研究第一部分对引起疣猴亚科毛色差异的相关毛色基因进行了初步探讨,以期能够对其适应性进化研究提供一些帮助基础信息。主要研究结果如下:通过PCR扩增、分子克隆等方法成功获得了东黑白疣猴、黑脊叶猴、川金丝猴、长鼻猴、黑腿白臀叶猴、长尾叶猴和黑叶猴七个疣猴亚科物种的MC1R、ASIP、MITF、MLPH、 TYR、TYRP1和SLC45A2共七个相关毛色基因各个外显子的序列;运用DNAstar、MEGA等软件对MC1R、ASIP、MITF、MLPH、TYR、TYRP1和SLC45A2七个相关毛色基因的测序结果比对拼接,获得它们完整的编码区序列,并对这七个相关毛色基因在疣猴亚科七个物种中发生的碱基和氨基酸突变进行了分析;采用PAMLX软件分别对七个相关毛色基因进行位点模型计算,在MLPH基因中发现第272个密码子受到正选择作用,我们推测MLPH基因第272个密码子的突变可能是形成疣猴亚科毛色差异的原因之一。川金丝猴属于疣猴亚科金丝猴属,是中国特有的珍稀濒危灵长类物种,同时也是中国生物保护的旗舰物种。因为人类活动的影响和捕猎,其种群数量受到了严重的威胁。为了更好的管理和保护川金丝猴,科学家们运用了各种分子标记如线粒体标记、微卫星标记等对川金丝猴的保护遗传学进行了各种研究。本研究第二部分采用了一种新技术(HRM),对川金丝猴的SNP位点进行基因分型,并将筛选的SNP位点用于川金丝猴的个体识别。主要研究结果如下:我们共获得了124个候选SNP位点,根据候选SNP位点的上下游序列设计合成了85对SNP位点引物,一共筛选出37对SNP位点引物能够成功进行PCR扩增且可以用于HRM分型;对37个SNP位点的七只川金丝猴个体的血液DNA样品的HRM分型进行了验证,37个SNP位点七只个体的HRM分型结果和测序结果完全一致,HRM分型准确率为100%;对15份粪便样品进行了HRM分型和个体识别,筛选出的37对SNP位点引物在15份粪便样品中有34个SNP位点全部分型成功,成功率为91.89%:利用获得的34个SNP位点的基因型,使用cervus 3.0进行Identity Analysis分析,分析结果和取样结果一致,15份粪便样品来自于7只川金丝猴个体:对34个SNP位点的个体识别能力进行估算,34个SNP位点的个体识别率在0.0364~0.4993之间,累计个体识别率CDP为99.99%;根据Heaton等人的研究构建SNP位点个体识别能力估算模型,34个SNP位点最高可识别的个体数为40,000只个体。川金丝猴目前的个体数量约为22,000只。因此,我们认为这34个SNP位点有足够的能力识别所有川金丝猴种群。
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