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桉树在我国种植面积广阔,每年产生大量桉叶,桉叶在我国除用于提取桉叶精油外,其余都未加利用,研究发现桉叶具有多种活性功能,主要有抗肿瘤、抗菌、抗氧化、抑制HIV逆转录酶、抑制葡萄糖基转移酶、抑制醛糖还原酶的活性,且抗氧化效果较相同多酚含量的茶多酚强。本文主要对桉叶提取物的抗氧化活性、活性物分离纯化以及活性物结构鉴定进行研究,为桉叶提取物作为抗氧化剂及其在功能性食品中的应用提供理论基础。本论文的研究内容和所得结果如下:
(1)以广林九号桉树的桉叶为原料,对其进行粗提取,再以不同极性溶剂分级萃取,得到不同萃取物,测定不同萃取物的清除自由基能力、还原能力、总酚含量等指标,筛选出桉叶抗氧化活性评价方法和抗氧化活性最强的组分。结果表明:在测定桉叶抗氧化物清除羟基自由基、超氧阴离子、H2O2、还原能力、DPPH自由基、ABTS自由基等抗氧化评价方法中,清除DPPH自由基、ABTS自由基、还原能力等方法稳定、快速、线性较好,因此综合考虑将清除DPPH自由基、ABTS自由基能力作为桉叶抗氧化物活性评价及分离纯化活性跟踪的方法;对桉叶不同萃取物活性评价表明,桉叶乙酸乙酯萃取物抗氧化活性最强,得到桉叶主要抗氧化组分,可对其进行进一步分离纯化研究。
(2)桉叶原料的种质资源的筛选。采用DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、还原能力等活性评价方法,对桉叶不同月份提取物抗氧化活性进行了测定,并测定了其总酚含量。结果表明:桉叶不同月份抗氧化活性差异显著(P<0.01),其中10月份抗氧化活性最强;总酚测定结果表明,不同月份总酚含量差异显著(P<0.01),总酚也是10月份含量最多。所以10月份为桉叶最佳采收期。结合总酚和抗氧化活性关系,进一步说明桉叶抗氧化活性物质主要多酚类物质。
(3)桉叶主要抗氧化组分的抗氧化活性及急性毒性研究。以抗氧化活性最强的桉叶乙酸乙酯萃取物为研究对象,采用DPPH自由基、ABTS自由基、还原能力及抗脂质过氧化4种方法检测乙酸乙酯萃取物的抗氧化能力,并通过小鼠灌胃的方法对其进行急性毒性研究。结果表明:桉叶乙酸乙酯萃取物具有较强抗氧化活性,其清除DPPH自由基、ABTS自由基、还原能力较相同多酚含量茶多酚、BHA、BHT、VE强;其抗脂质过氧化作用表明,桉叶抗氧化物是极性偏大的物质;急性毒性结果表明,桉叶抗氧化物基本无毒,可安全开发利用。
(4)桉叶主要抗氧化物的分离纯化及结构鉴定研究。采用Diaion HP-20大孔吸附树脂、Toyopearl HW-40凝聚树脂、MCI Gel CHP20树脂和制备液相等方法,对乙酸乙酯组分进行分离纯化,并用DPPH、ABTS抗氧化活性评价方法对分离纯化出来的各组分进行活性跟踪。结果表明:从桉叶乙酸乙酯萃取物中分离出5种主要抗氧化活性单体,其中四种已鉴定出,分别为没食子酸、1,2,3,4,6-O五没食子酰葡萄糖、3-galloyl-4,6-HHDP-D-glucose(gemin D),英国栎鞣花素,另外一个异构体鞣质的分子量为786,其结构有待进一步鉴定。