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研究背景:偏头痛是一种常见的反复发作的疾病,患病率较高,有较高的社会经济负担,并且是全世界因残疾而丧失生命的第七大原因。偏头痛最常见的亚型是无先兆偏头痛,其中主要的症状是头痛、恶心、呕吐和畏光。目前,三叉神经血管反射学说是偏头痛发病机制的主流学说,该学说认为疼痛的传导路径分为三部分。三叉神经节为该通路一级神经元,三叉神经颈复合体为二级神经元,丘脑是其三级神经元。C-fos原癌基因是一种即刻早期基因,在中枢神经系统的上升区,出现痛觉刺激时,F0S蛋白或c-fos的表达增加。c-AMP反应元件结合蛋白CREB介导多种基因的转录调控,CREB磷酸化后(p-CREB)导致即早期基因c-fos的启动,而c-fos基因可以作为脑干和脊髓内伤害性传导通路神经元启动的标志物,且被广泛应用于偏头痛的研究中。近年来中药治疗偏头痛取得了良好的临床疗效,并且相比于西药,不良反应少。川芎作为治疗头痛“圣药”,在临床治疗中应用非常广泛。正所谓“中药不传之秘在于量”,临床上多有使用大剂量川芎治疗头痛,往往取得奇效。然而临床上极少使用单味川芎治疗头痛,且川芎药量过大恐燥性伤阴,因此大剂量使用要配伍以制约其燥性。白芍苦酸微寒,二者作为药对出自《仙授理伤续断秘方》之四物汤,一散一敛,滋而不腻,寒温并举,补血而不滞血,行血而不伤血,共奏活血养血、祛瘀止痛之功。白芍亦为治疗头痛常用药,有人总结出白芍治疗头痛时平均用量为18克左右。目的:用白芍制约大剂量川芎的燥热之性,以川芎白芍在四物汤里原比例1:1为基础,复制硝酸甘油偏头痛大鼠模型,以大鼠痛觉敏化程度和三叉神经血管通路中c-fos、CREB、pCREB的表达为衡量指标,探讨重用川芎为主配伍白芍(90:30,60:30,30:30,45:15,30:15,15:15)治疗偏头痛的效果,为临床应用川芎白芍治疗头痛提供更多参考。方法:实验用SPF级雄性SD大鼠72只,体重200±20g,随机分为对照组(n=8)、模型组(n=8)、芎芍 A 组(90g:30g)(n=8)、芎芍 B 组(60g:30g)(n=8)、芎芍 C 组(30g:30g)(n=8)、芎芍 D 组(45g:15g)(n=8)、芎芍 E 组(30g:15g)(n=8)、芎芍 F组(15g:15g)(n=8)、舒马普坦组(n=8)9组,每组8只。以上各组汤剂均加8倍量水,合煎三次,分别减压浓缩至生药浓度为1.2g/ml,0.9g/ml,0.6g/ml,0.6g/ml,0.45g/ml,0.3g/ml。对照组:颈背部皮下注射2ml/kg生理盐水,每周注射1次,共3次,于第二次注射生理盐水后给予l0ml/kg/d生理盐水灌胃共1周。偏头痛模型组:颈背部皮下注射硝酸甘油溶液10mg/kg(5mg/ml)造模,每周一次,共3次,于第二次造模后给予10ml/kg/d生理盐水灌胃,共1周。舒马曲普坦组:其他处理同偏头痛模型组,于第二次造模后给予琥珀酸舒马普坦6mg/kg/d灌胃,共1周。川芎白芍组:其他处理同偏头痛模型组,于第二次造模后给予芎芍A组12g/kg/d、芎芍B组9g/kg/d、芎芍C组6g/kg/d、芎芍D组6g/kg/d、芎芍E组4.5g/kg/d、芎芍3g/kg/d。(分别按成人每天生药量120g、90g、60g、60g、45g、30g算,大鼠用药量按成人药量6倍算),川芎白芍汤剂灌胃,共1周,普通饲养。末次造模后2h测定机械和温度痛阈,然后灌注固定取脑组织,进行免疫组化染色。光镜下观察各组大鼠脑切片c-fos、CREB、pCREB的表达,用Image Pro Plus 6.0对切片中阳性细胞计数,再进行统计学处理。结果:1、痛阈:与对照组相比,模型组机械痛阈和温度痛阈均有所降低。与模型组相比,川芎白芍不同比例和舒马普坦组的机械痛阈有所上升,以芎芍B、C、D组和舒马普坦组上升明显(P<0.05),其中芎芍C组上升程度最高(P<0.01)。对于温度痛阈,与模型组相比,芎芍不同比例各组和舒马普坦组均有所上升,芎芍A、B、C、D、E组和舒马普坦组上升明显(P<0.05),以芎芍C组上升程度最高(P<0.01)。2、c-fos:与对照组相比,模型组丘脑处表达明显减少(P<0.01),在三叉神经脊束核表达明显增多(P<0.01)。在丘脑处,与模型组相比,芎芍各不同比例和舒马普坦组c-fos阳性细胞表达均有所上升,以芎芍D组(45:15)最为显著(P<0.01)。在三叉神经脊束核处,与模型组相比,芎芍各不同比例和舒马普坦组c-fos阳性细胞表达有所减少,以芎芍D组最为显著(P<0.01)。3、CREB:与对照组相比,模型组丘脑和三叉神经脊束核处的CREB表达水平无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,芎芍各不同比例和舒马普坦组CREB表达水平也无明显变化(P>0.05)。4、pCREB:与对照组相比,模型组丘脑处pCREB阳性细胞表达水平无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,芎芍各不同比例和舒马普坦组丘脑处pCREB阳性细胞表达水平无明显变化(P>0.05)。造模后,在三叉神经脊束核处,pCREB阳性细胞表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组相比,芎芍各不同比例和舒马普坦组pCREB阳性细胞表达水平降低,以芎芍C组最为明显(P<0.01)。结论:1、川芎白芍不同比例配伍能提高偏头痛大鼠机械和温度痛阈,改善痛觉敏化行为,以川芎白芍30g:30g效果最好。2、川芎白芍不同配比能调节丘脑和三叉神经脊束核c-fos、pCREB的表达。3、CREB作为c-fos启动的上游因子,在三叉神经脊束核通过磷酸化的形式激活c-fos的表达,参与偏头痛的产生。