【摘 要】
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单链抗体2F3在大肠杆菌中诱导表达,形成无活性的包涵体。对破碎菌体之后获得的包涵体,以低浓度变性剂进行了初步纯化;使用盐酸胍和巯剂乙醇溶解包涵体,在变性条件下,利用镍离
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单链抗体2F3在大肠杆菌中诱导表达,形成无活性的包涵体。对破碎菌体之后获得的包涵体,以低浓度变性剂进行了初步纯化;使用盐酸胍和巯剂乙醇溶解包涵体,在变性条件下,利用镍离子螯合层析柱纯化,目的蛋白纯度达到电泳一条带。将纯化后的变性蛋白在不同浓度的盐酸胍中平衡,利用360 nm处的光吸收找到单链抗体发生聚集的变性剂浓度;测定荧光发射光谱和圆二色谱,做折叠曲线。其中内源荧光探针为酪氨酸,折叠曲线显示转折点在2 mol/L盐酸胍处,表明酪氨酸所处微环境的改变;外源荧光探针为苯氨基萘磺酸(ANS),曲线折点位于1 mol/L盐酸胍,提示疏水区域的形成;圆二色谱转折点位于2mol/L盐酸胍处,对应二级结构的形成。为了提高单链抗体复性产率,我们利用稀释法进行复性研究,尝试了一系列的小分子添加剂,其中有我们自己合成的两种β-环糊精的衍生物。利用360 nm处的光吸收来反应复性体系中蛋白的聚集程度;通过活力测定来检测正确折叠产物的量。
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