论文部分内容阅读
氯胺酮是临床上常用的小儿全麻药，大多研究表明，动物在大脑发育关键时期暴露于氯胺酮会引起广泛的神经退行性变以及后期发育过程中的认知功能障碍。有学者发现，氯胺酮可能通过抑制海马脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）的表达引起再认记忆的损伤，而外源性单唾液酸四己糖神经节苷脂（monosialotetrahexosylganglioside,GM1）对中枢神经系统损伤具有明显的修复作用，且能促进BDNF的合成和释放，因此，我们推测GM1能够通过增加BDNF的分泌减轻氯胺酮对发育期大脑的神经毒性。 目的: 探究外源性GM1对氯胺酮所致的发育期大脑神经损伤的影响及机制。 方法: 选取出生后5天（P5）SPF级SD大鼠，雌雄各半，随机分为对照组（Control）、氯胺酮组（Ketamine）、GM1组、氯胺酮+GM1组（Ketamine+GM1）、氯胺酮+GM1+IgY组（Ketamine+GM1+IgY）、氯胺酮+GM1+BDNF中和抗体组(Ketamine+GM1+anti-BDNF)。通过对P7大鼠进行氯胺酮麻醉构建新生大鼠麻醉模型。Control组P5-P7每天腹腔注射与GM1等体积的生理盐水，P7腹腔注射与Ketamine等体积的生理盐水；Ketamine组P5-P7每天腹腔注射与GM1等体积的生理盐水，P7腹腔注射氯胺酮20mg/kg，每隔90min重复给予，共注射5次，麻醉持续6h；GM1组P5-P7每天腹腔一次性注射GM130mg/kg，共进行三天，每次注射间隔24h，P7腹腔注射与Ketamine等体积的生理盐水；Ketamine+GM1组P5-P7每天腹腔注射GM1（方法同前），P7进行氯胺酮麻醉（方法同前），P7腹腔注射GM1需在氯胺酮麻醉结束后1h进行；Ketamine+GM1+IgY组P5-P7在每天给完GM1后滴鼻给予IgY（与anti-BDNF等体积）；Ketamine+GM1+anti-BDNF组P5-P7在每天给完GM1后滴鼻给予anti-BDNF100ug/kg。各组大鼠取1/3于P32-P37进行水迷宫实验，检测行为学改变。各组大鼠另2/3于麻醉后24h取脑进行相关指标检测。TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测海马DG区神经细胞凋亡数目，Western blot检测海马cleaved-caspase3、BDNF、p-AKT、p-ERK的蛋白表达水平。 结果: 1.接受氯胺酮处理的P7大鼠认知功能产生损伤，海马DG区有大量神经细胞凋亡，应用外源性GM1可以改善氯胺酮引起的认知功能损伤，减少氯胺酮引起的神经细胞凋亡； 2.GM1能够促进新生大鼠海马BDNF、p-AKT、p-ERK蛋白的表达； 3.anti-BDNF抑制了GM1对氯胺酮所致认知功能损伤的改善作用，也抑制了GM1对氯胺酮所致神经细胞凋亡的减少作用； 4.anti-BDNF抑制了新生大鼠海马BDNF、p-AKT、p-ERK蛋白的表达。 结论: 外源性GM1通过增加BDNF的表达水平减轻氯胺酮对发育期大脑的损伤作用。