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卵巢癌是我国最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一,虽然经手术、化疗、放疗可清除临床上显著的肿瘤,但其五年生存率仍低于45%。肿瘤干细胞常被认为是包括卵巢癌在内许多肿瘤转移后复发的根源。同时Oct4作为维持胚胎干细胞和原始生殖细胞自我更新和多潜能分化能力的重要转录因子,也常在卵巢癌肿瘤细胞的中表达增高,然而,其在卵巢癌进展中潜在的分子机制尚未完全阐明。研究目的:本研究旨在探讨作为CSC标志物之一的Oct4在卵巢癌进展中发挥的作用并探讨其潜在的机制。通过进行体内外实验分析的方式,发现Oct4在卵巢癌进展中起到的生物学功能,并进一步阐明其在调控上皮性卵巢癌侧群细胞增殖能力,细胞周期,侵袭能力,细胞迁徙,凋亡等多方面的分子机制。研究方法:1、通过Hoechst侧群细胞分离鉴定技术,分离来自人上皮性卵巢癌SKOV3和A2780细胞系的SP细胞及NSP细胞,并用于本研究。2、分析Oct4在SP及NSP细胞中的表达水平差异,在SP细胞中下调Oct4表达,在NSP细胞中过表达Oct4,随后通过CCK-8、流式细胞术、免疫荧光检测细胞侵袭和迁移等体外功能检测技术,研究Oct4对于卵巢癌侧群细胞的细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、化疗耐药等多方面的影响。3、通过对下调/过表达上皮性卵巢癌Oct4后引起的下游信号通路蛋白磷酸化差异,应用免疫印迹等方法进一步研究JAK/STAT信号通路在Oct4对肿瘤细胞功能调控中发挥的作用。4、通过构建异种移植瘤模型,进一步通过动物体内实验研究验证Oct4/JAK/STAT通路在卵巢肿瘤细胞中发挥的作用。研究结果:1、与NSP细胞相比,Oct4在SKOV3和A2780细胞的SP细胞中呈现高表达。下调基因Oct4的表达水平能够抑制SP细胞活力、影响肿瘤发生和降低肿瘤细胞的化疗耐药性,并诱导SP细胞G2/M期阻滞,而Oct4的上调则会增加NSP细胞恶性特征和促进其侵袭能力。2、上调NSP细胞中Oct4的表达,将显著增加了JAK和STAT家族中蛋白质的磷酸化水平,特别是对于JAK1和STAT6。此外,当加入泛通路抑制剂peficitinib时,可有效逆转Oct4诱导产生的抑制肿瘤细胞凋亡和促进细胞增殖活力,侵袭性和肿瘤发生的作用结论:1、Oct4在SKOV3/A2780的侧群细胞亚群中高表达。2、下调Oct4的表达可显著降低SP细胞的细胞活性,致瘤性和对化疗药物的敏感性。上调Oct4表达则赋予NSP细胞增强的恶性表现。3、Oct4通过激活JAK/STAT信号通路加速卵巢癌的进展,表明Oct4/JAK/STAT信号通路有可能成为卵巢癌的新的治疗靶点,为今后的进一步研究提供基础。