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目的:胎儿结肠上皮细胞(FHC)经缺氧/再复氧(H/R)和脂多糖(LPS)处理,观察紧密连接蛋白表达量及分布的变化,观察低氧诱导因子-1a(HIF-1a)和核转录因子-kB(NF-kB)及其下游信号通路表达的变化,并探究大黄素干预对紧密连接蛋白及各通路的影响。方法:胎儿结肠上皮细胞株(FHC)经缺氧再复氧和脂多糖处理来模拟肠上皮细胞的缺血/再灌注损伤。共分为4组:?常氧组:用温度为37℃,含95%空气和5%CO2温箱,用含10%胎牛血清(Gibico)的DMEM:F12培养基培养细胞作为正常对照。?H/R+LPS组:于37℃下将细胞放入含1%O2,94%N2,5%CO2混合厌氧气体的厌氧培养箱3h后复氧培养2h,同时给予LPS为1mg·L-1的含10%胎牛血清(Gibico)的DMEM:F12培养基刺激。?大黄素干预组:处理为在?的基础上给予80μmol·L-1大黄素进行干预。?DMOG处理组:常氧37℃培养条件下加用二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)10m M处理5h。用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测紧密连接蛋白ZO-1、occludin、低氧诱导因子-1a(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸化核转录因子-kB抑制蛋白-a(p IkB-a)、磷酸化核转录因子-kBp65(p NF-kBp65)、环氧化酶-2(COX-2);间接免疫荧光观察紧密连接蛋白ZO-1的分布。结果:?HR+LPS组,DMOG处理组,大黄素干预组的ZO-1表达量均较常氧组减少,大黄素干预组较HR+LPS组表达量多(p<0.05),HR+LPS组,DMOG处理组,大黄素干预组的occludin表达较常氧组减少,差异无统计学意义(p>0.05);免疫荧光结果显示,常氧组细胞紧密连接蛋白ZO-1沿细胞膜分布,连续圆滑,排列规则,DMOG处理组的ZO-1表达明显减少,不连续;HR+LPS组表达量减少,排列不规则,不连续,出现断裂,锯齿状等分布,大黄素干预组较HR+LPS组相比,表达量稍多,排列不规则缓解,偶有不连续,断裂等分布;?与常氧比较,HR+LPS组,DMOG处理组,大黄素干预组HIF-1a/NF-kB-COX-2信号通路各因子表达量均升高(p<0.05),大黄素干预组较HR+LPS组相比,HIF-1a/NF-kB-COX-2信号通路因子表达减低(p<0.05);?与常氧组比较,HR+LPS组,DMOG处理组,大黄素干预组VEGF表达均升高(p<0.05)大黄素干预组VEGF表达较HR+LPS组表达减少(p<0.05)。结论:?缺氧再复氧与脂多糖刺激肠上皮细胞可使其紧密连接蛋白表达减少,结构破坏,分布异常;?缺氧再复氧与脂多糖刺激肠上皮细胞可激活HIF-1a/NF-kB-COX-2信号通路,使用DMOG稳定表达HIF-1a亦可引起肠上皮细胞中NF-kB,COX-2的激活及紧密连接蛋白的变化,进一步验证了HIF-1a对肠上皮细胞紧密连接蛋白的损伤作用及HIF-1a对NF-kB通路及COX-2的调控作用;?缺氧再复氧与脂多糖刺激肠上皮细胞引起的紧密连接蛋白变化可能与HIF-1a的下游调控因子VEGF有关;④大黄素干预可减轻缺氧再复氧与脂多糖刺激肠上皮细胞紧密连接蛋白表达量及分布的破坏,可能与其能抑制HIF-1a/NF-kB-COX-2信号通路及HIF-1a下游靶因子VEGF表达增加有关。