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目的 目前,转bcl-2基因治疗缺血性脑血管病的研究尚处于探索阶段,其中载体的选择和基因导入途径是该治疗能否临床应用的关键。国内外多采用以病毒为载体通过脑缺血局部注射的方法,但该方法由于一些不可避免的缺陷使临床广泛应用受到很大限制。本实验为寻求更为简便快捷的治疗方法,用质粒作为载体携带bcl-2基因,直接注入短暂性局灶性脑缺血大鼠的侧脑室内,观察该方法能否收到良好的治疗效果。热休克蛋白70(Heat shock protein 70,Hsp70)在应激状态的细胞内大量存在,对缺血状态的细胞有保护作用。近来有研究发现hsp70蛋白的脑保护作用可能与其抗凋亡效应有关。因此,本实验欲观察bcl-2的过度表达能否引起hsp70蛋白表达的变化,为进一步探讨二者之间的关系提供依据。 方法 采用改良的Longa栓线法构建大鼠局灶性脑缺血模型,用立体定位仪确定大鼠侧脑室精确位置,缺血后立即向治疗组和对照组大鼠侧脑室中分别注入质粒pLXSN-bcl-2(100ng/ul)、空质粒pLXSN(100ng/ul)和生理盐水各20ul。缺血一小时后将拴线拔出进行缺血鼠脑再灌注。存活的各组大鼠分成再灌注3h、6h、24h、48h、72h组,在各时间点将大鼠断头取大脑。用免疫组织化学方法观察bcl-2蛋白和hsp70蛋白表达情况,用2%TTC(2%2,3,5-triphenyltetrazolium chloride红四氮唑)染液显示鼠脑梗死灶,并用直接测量法比较治疗组和对照组大鼠各时间点脑梗死体积变化。 结果 1.再灌注3h大鼠脑内即可见bcl-2蛋白、hsp70蛋白表达,随后表达逐渐增加,均在再灌注24h达到峰值,再灌注48h、72h表达逐渐降低,二者均在梗死灶周围的“半暗带”区大脑皮质以及对损伤比较敏感的海马、尾状核和丘脑的部分区域表达最强。但治疗组两种蛋白的表达在各时间点均较对照组强,而注射空质粒和生理盐水的两个对照组之间两种蛋白的表达在各个时间点均无差异。治疗组可见bcl一2蛋白在全脑广泛表达,而对照组仅在梗死灶局部少量表达。 2.再灌注6h、24h、48h、72h治疗组大鼠的脑梗死体积较对照组小,两个对照组中大鼠的脑梗死体积无差异。结论 1.向大鼠侧脑室中直接注射质粒pLXSN一bcl一2后,bcl一2基因能够在短暂性局灶性缺血的大鼠脑组织中广泛表达,且以缺血区表达最强,表达产物能发挥生物学效应,减小鼠脑梗死体积,从而保护缺血脑组织,因此该治疗方法具有可行性。 2.bd一2基因的表达促进了hsP70基因的表达,引起缺血区hsp70蛋白增多,间接保护了缺血脑组织。因两种蛋白表达的时间窗一致,且均有抗凋亡作用,因此推测二者之间可能存在协同抗凋亡效应。