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为探明土壤接种哈茨木霉T2-16对西瓜枯萎病发生的影响及其微生态学机制,本试验利用连作6年西瓜土壤设计3个处理方式:105个/g木霉孢悬液拌土(A)、105个/ml木霉孢悬液浸种(B)和清水对照(CK)进行盆栽试验。通过调查栽种在该土壤之中的西瓜品种早佳“8424”的枯萎病发病率和生长势,木霉菌在西瓜根部定殖动态变化,以及根际土壤酶活性和微生物群落结构等指标,来探究哈茨木霉T2-16微生态调控防治西瓜枯萎病的机理,为西瓜枯萎病的综合防控提供理论依据。试验主要结果如下:1、哈茨木霉T2-16不同处理方式能有效防控西瓜枯萎病的发生,同时对西瓜植株具有促生效应。30d后,各处理西瓜枯萎病发生程度趋于稳定状态。其中,A处理防治西瓜枯萎病效果最好,其相对防效达到了67.41%;另外,该处理中的单株西瓜平均蔓长、地上部鲜重分别达到了87.25 cm、35.86 g,较CK分别增加了54.20%、179.07%。2、以PEG-CaCl2为介导,利用原生质体转化法建立了哈茨木霉T2-16的最适转化体系,20℃,1000μg/ml的G418浓度培养条件下,成功获得了能稳定表达绿色荧光蛋白的哈茨木霉T2-16转化菌株TG2-10。通过生物学特征鉴定发现TG2-10与野生型菌株生长速率、产孢量、生防效果以及菌落形态等特性无明显差异。利用激光共聚焦显微镜观察发现转化菌株TG2-10能侵染并有效定殖于西瓜根系组织,并在西瓜根系缠绕形成类网状结构。3、利用实时荧光定量PCR技术对木霉菌与尖孢镰刀菌西瓜专化型(FON)进行定量检测,结果表明施加哈茨木霉T2-16后,根际土壤中木霉菌数量相对于清水对照增加了10倍的数量集,且在发病全过程中保持稳定水平;与此同时,随着西瓜枯萎病发生,西瓜根际土壤和根系中FON数量发生显著变化,A处理的根际土壤中FON数量呈先增加后降低的变化趋势,西瓜根系中FON数量低于定量检测下限;相反地,CK处理西瓜根际土壤中FON数量呈先降低后增加的变化趋势,西瓜根系中FON数量呈先升高后降低的变化趋势。说明哈茨木霉T2-16能诱导木霉菌高效增殖来有效阻止FON对西瓜植株的侵染。4、土壤中施加哈茨木霉T2-16能有效增加可培养细菌和放线菌的数量,减少可培养真菌的数量,在发病高峰期时效果最明显。同时,对西瓜根际土壤的酶活性检测发现,哈茨木霉T2-16能不同程度提高土壤中酸性磷酸酶(S-ACP)、蔗糖酶(S-SC)、纤维素酶(S-CL)以及过氧化氢酶(S-CAT)活性;随着西瓜枯萎病的发生,根际土壤酶活性有着不同程度的变化,其中S-ACP和S-CAT活性呈先上升后降低再上升的趋势,S-CL活性不断上升至发病高峰期后逐渐下降,而S-SC活性呈显著增加趋势。5、通过微生物16S/ITS高通量测序分析发现,哈茨木霉T2-16能提高土壤中细菌微生物多样性,降低真菌微生物多样性。分析细菌种群结构发现,哈茨木霉T2-16能显著降低土壤中Mizugakiibacter、Jatrophihabitans和Gemmatirosa等细菌菌属的丰富度,增加Sphingomona、Streptomyces和Pseudomonas的丰富度,其中Pseudomonas的丰富度增加了130多倍。分析真菌种群结构发现,Trichoderma在A处理中维持在48.98%-70.48%的丰富度,而在CK处理中只有0.74%-2.54%的丰富度,进一步说明哈茨木霉T2-16能稳定地在土壤及西瓜根际定殖。并且,哈茨木霉T2-16能不同程度降低土壤中Penicillium、Chaetomium、Aspergillus等真菌菌属的丰富度。另外发现,土壤中细菌菌属Sphingomonas、Streptomyces、Pseudomonas和真菌菌属Trichoderma、Arthrographis、Talaromyces等与西瓜枯萎病发病率呈负相关关系,而细菌菌属Jatrophihabitans、Escherichia-Shigella、Gemmatimonas和真菌菌属Chaetomium、Dendroclathra、Zopfiella等与西瓜枯萎病发病率呈正相关关系。