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欧洲细管葱是湖北五峰新桥科技有限公司从德国引进的一种食用葱,其冻干产品主要出口欧洲。该葱在五峰规模化种植后,普遍出现叶枯症状,严重影响其产量和品质。目前对该病的病原学及防治尚无系统研究报道。本文在对病害症状进行了一般观察的基础上,研究了病原菌的培养性状及相关生物学特性,并进行了分子鉴定,同时,测定了几种化学药剂对病原菌的室内毒力效果,对筛选的几种内生拮抗细菌进行了初步研究。主要结果如下:
1.确定了病原菌的分类地位:从病植株上分离得到的菌株Alternariasp.,用菌丝块接种欧洲细管葱叶片进行致病性测定,证实Alternariasp.为致病菌。该菌在PDA培养基上,菌落平展、圆形、浅褐色至暗褐色,菌丝密绒状,灰白色,菌落边缘整齐,中心部位淡灰色至黑色,外围灰白色。分生孢子梗暗色,单生或丛生,直或略弯曲,偶有分枝,具4~7个隔膜,大小3.83~5.1μm×5.1~22.95μm,分生孢子梗顶端膨大,顶生分生孢子。分生孢子单生或链生,孢子大小10.2~45.9μm×7.65~21.85μm,倒棍棒形或椭圆形,灰色或暗黄褐色,表面光滑或具疣状突起,多有喙,成熟孢子具有横隔膜3~7个,纵隔膜0~3个,隔膜处略缢缩,表面密布疣状细点。rDNA-ITS测序结果与GeneBank中的序列进行同源性比较发现该菌株与Alternariaalternata的同源性高达99%。根据形态学特征和分子鉴定结果,确认该病原菌为Alternariaalternata。
2.明确了病原菌相关生物学特性:在有无光照或连续光照的条件下病菌均可生长和产孢,光暗交替最有利于菌丝的生长,黑暗条件下促进病菌产孢。病菌生长发育的最适温度为25~30℃。pH2.0~12.0均能生长,最适pH6.0~9.0。该菌在以蔗糖和淀粉为碳源的培养基中菌落生长最快,其次为和乳糖;较适宜生长的氮源为氯化钙,对尿素和甘氨酸也能充分利用。试验证明55℃的温水处理10min.可杀死菌丝体、抑制孢子萌发。
3.测定了几种化学药剂的抑菌防病效果:不同化学药剂对病菌室内毒力效果测定表明菌克星、稀酰吗啉、多宝对该菌生长具有明显抑制作用,有效中浓度(EC50)分别为5.19mg/L、18.39mg/L、88.87mg/L,以菌克星的抑菌效果最好;50%氯溴异氰尿酸抑制效果最差,供试的10种药剂测定浓度与抑菌作用均呈正相关。10种药剂田间防效结果表明:10天后稀酰吗啉、百菌清和菌克星有较好防效,其中菌克星田间防效达73.1%,可以应用于大田试验,建议田间以500-800倍稀释喷雾。
4.筛选鉴定了内生拮抗细菌:通过对欧洲细管葱体内内生细菌的分离,得到了7株内生细菌菌株,进一步通过平板对峙培养,筛选出内生细菌wf-A7菌株对欧洲细管葱叶枯病菌具有明显的抑菌作用;生防菌株wf-A7生物学特性研究表明:该生防菌最适宜的温度为30℃,最适宜的PH值为6.5,最适宜生长的碳源为淀粉,最适宜生长的氮源为蛋白胨。通过16SrDNA分子鉴定,将序列与基因库(genebank)中比对,结果表明该生防菌与Burkholderiacepacia菌株的同源性为99%,表明该菌株为假单胞菌属、洋葱伯克霍尔德菌。