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MEF2C(Myocyte Enhancer Factor 2C)是肌细胞增强因子2(MEF2)家族的成员之一,参与多种基因的表达与调控,是重要的转录调节因子。MEF2C基因的m RNA前体可通过不同的剪切方式而产生不同的可变剪切片段,因此,MEF2C基因能够编码多种蛋白质。现阶段,在人、小鼠以及其他相应畜禽资源中分别鉴定出MEF2C基因存在多个剪切体,MEF2C基因可变剪切体在鸭上的研究鲜有报道且属于基础性研究,尚未进行系统的探讨;启动子片段被认定是调控基因转录起始时间和表达程度的关键,在基因的表达调控发挥着重要作用,目前对畜禽MEF2C基因启动子的研究很少。因此,本研究以兴义鸭作为试验材料,MEF2C作为候选基因,一方面,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、生物信息学分析,对MEF2C基因启动子多态性进行研究;另一方面,通过实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR),快速反转录、转染、鸭成肌细胞体外培养等试验技术,对兴义鸭MEF2C基因可变剪切体进行研究,从m RNA及细胞水平上探究其可变剪切体的表达差异关系。本研究的主要结果如下:1.成功克隆兴义鸭MEF2C基因启动子片段,并筛选出兴义鸭MEF2C基因启动子区的8个SNP位点,分别为T-190A、A-232G、A-285G、A-617T、G-1420A、A-1437C、T-1504G、A-1524G。生物信息学分析发现:T-190A、A-232G、G-1420A突变位点周围HOXA4、GCN4、Pit-1a、IRF-1等重要转录因子结合位点消失,继而生成Oct-1、ICSBP 2个新的转录因子结合位点。与屠宰性状关联分析结果表明,T-190A不同基因型个体的兴义鸭活重存在显著差异(P<0.05),G-1420A不同基因型个体的兴义鸭腿肌率具有显著差异(P<0.05)。2.在兴义鸭不同组织中发现且已鉴定了MEF2C基因的两个可变剪切体,将其命名为MEF2C-a和MEF2C-b,长度分别为1398bp和1302bp,分别编码465、433个氨基酸,二者相差96bp,同源性分析发现两个转录本在不同物种间同源性高达95%,高度保守。3.MEF2C基因两个可变剪切体在兴义鸭(母鸭、公鸭)30日龄、60日龄、90日龄、120日龄、150日龄这5个时期的7个不同组织中的m RNA表达量检测结果表明:MEF2C-a和MEF2C-b二者具有显著的组织效应和性别效应。在各个日龄阶段,两个可变剪切体在各组织之间均有表达,且不同组织不同性别之间m RNA表达差异达到显著(P<0.05)与极显著(P<0.01)水平。剪切体MEF2C-a、MEF2C-b在腿肌、胸肌、心肌和大脑当中始终保持高表达量(个别日龄除外),在肝、肺、肾中低表达。4.首次构建了兴义鸭MEF2C基因两个可变剪切体的真核表达载体:pEGFP-C1-MEF2C-a和pEGFP-C1-MEF2C-b,并且成功在鸭成肌细胞中表达。通过qRT-PCR方法检测过表达MEF2C基因可变剪切体MEF2C-a和MEF2C-b后肌肉分化相关基因Myf5、Myo D1、p38、myogenin、MRF4、NFAT、p300、ERK5的m RNA表达量情况,结果显示:过表达MEF2C-a之后,Myf5、Myo D1、MRF4的表达量均增加,p38、NFAT、p300、ERK5、myogenin的表达量均降低;过表达MEF2C-b之后,Myf5的表达量增加,相关肌肉分化关键基因Myo D1、p38、MRF4、NFAT、p300、ERK5、myogenin的表达量均降低。