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目的:优化鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,C.psittaci,Cps)禽鸟株分离鉴定培养技术,通过测序及进化树分析ompA基因的多态性,研究Cps的种系发育史及获得可靠Cps感染的流行病学资料,掌握衡阳地区Cps的流行病学特征,从而为Cps感染的预防、诊断、治疗措施提供依据。方法:收集衡阳地区可疑的禽鸟标本,利用分子生物学技术,提取禽鸟肝组织全基因组DNA,设计MOMP特异性引物,PCR扩增约264bp的基因片段,用1.7%琼脂糖凝胶电泳分离。将PCR阳性禽鸟标本肝组织匀浆液接种到单层敏感细胞株人喉癌上皮细胞(Hep-2)细胞和非洲绿猴肾细胞(Vero)中培养,免疫荧光染色法(IF)鉴定Cps包涵体,免疫荧光显微镜下观察两种细胞内包涵体形态的变化。按照文献设计另一对MOMP特异性引物,PCR扩增约1000bp的基因片段,用1.2%琼脂糖凝胶电泳分离,将阳性PCR产物进行纯化后送往测序公司进行测序,同时从Genebank中获得Cps各型参考株的ompA基因序列,利用软件ClustalX2和MEGA3构建系统进化树分析临床株与各参考株之间的亲缘关系。通过BLAST分析8例标本基因间的相似性。结果:通过PCR扩增及测序的方法从591例禽鸟标本(其中鹦鹉425只,鸽子23只及其它类型禽鸟143只)中检测到8例阳性,其中7例来源于鹦鹉,染率约为1.64%,1例来源于相思鸟。鸽子的染率为0%,其它类型禽鸟的染率约为0.69%;8例阳性标本在Hep-2及Vero细胞中成功培养出7株,成功率为87.5%;通过Cps在Hep-2细胞与Vero细胞中培养生长情况的比较,发现Hep-2细胞在原代培养时其胞内包涵体形成单位(IFU)数量大于Vero细胞,培养三代后免疫荧光染色发现,Vero细胞内的IFU数量较Hep-2细胞大;对8例阳性禽鸟标本PCR产物ompA基因序列进行测序,测序结果与Cps各型参考株ompA序列进行软件分析,系统进化树显示其中7例为A型,另外一例暂未能分型;将8例阳性禽鸟标本PCR产物ompA基因序列与C. psittaci6BC标准株ompA基因进行BLAST分析,Cps6BC与其中7例的相似度在92%~99%之间,另外一例与Cps6BC的相似度仅为58%;将E9的ompA基因与Genebank中其它已知菌株基因进行比对也未能对其进行确定。结论:(1)成功分离Cps禽鸟株7株,并完善了Cps阳性禽鸟株分离鉴定培养技术;(2)衡阳地区Cps可能主要以鹦鹉为其宿主,以基因型A为主要型别,且存在一定的变异。