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高效且廉价的蛋白质复性方法的研究一直是生物工程下游技术中的一个热点。本文将离子交换色谱法(ion exchange chromatograpby,IEC)与人工分子伴侣法(artificial molecular chaperon,AMC)相结合,发展了人工分子伴侣-离子交换色谱法(AMC-IEC),以脲变性/二硫苏糖醇还原溶菌酶(lysozyme)为模型蛋白,研究该方法用于蛋白复性的效率,并将此方法应用于重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)的复性。本论文包括以下几个部分:1.文献综述:对研究蛋白质复性的意义、蛋白复性方法及蛋白折叠液相色谱法、重组人粒细胞集落刺激因子分离纯化等方面进行了综述。共包括文献97篇。2.人工分子伴侣-离子交换色谱法复性还原变性溶菌酶:将IEC和AMC相结合,发展了AMC-IEC,并用于脲变性/二硫苏糖醇还原溶菌酶的复性,对流动相中脲浓度、流动相中β-CD浓度、流动相pH、流动相流速、去垢剂与溶菌酶摩尔比、去垢剂种类等进行了优化。与AMC和IEC相比,在实验考察的初始蛋白浓度范围内,AMC-IEC所得的活性回收率更高,同时,该方法对初始浓度很高的还原变性溶菌酶能得到较高的活性回收率。当溶菌酶的初始浓度高达200 mg/mL时,其活性回收率仍能达到63%。另外,在AMC-IEC复性过程中,色谱柱的使用寿命比通常IEC方法更长。实验结果表明这种方法是一种高效和廉价的蛋白复性方法。3.一步人工分子伴侣-离子交换色谱法辅助还原变性溶菌酶的复性:以月桂酰基肌氨酸钠(Sodium Lauroyl Sarcosine,Sarkosyl,SLS)作为蛋白变性剂,发展了一步人工分子伴侣-离子交换色谱法,对还原变性溶菌酶进行了复性研究。对流动相中脲浓度,流动相中β-环糊精(β-CD)浓度,流动相pH,流动相流速等复性条件进行了优化。结果表明,当流动相中脲浓度为3.0 mol/L,β-CD浓度为8 mmol/L,流动相pH为8.0并且流速为1 mL/min时,活性回收率最高。4.人工分子伴侣-离子交换色谱法复性重组人粒细胞集落刺激因子:用不同提取方式对rhG-CSF包涵体进行了溶解,结果表明,用2%Sarkosyl溶液能很好的溶解rhG-CSF包涵体。以β-CD为剥离剂,采用一步AMC-IEC和AMC-IEC对Sarkosyl溶解的rhG-CSF进行了复性,结果表明这两种方法所得蛋白质量回收率相当,且远高于IEC方法所得质量回收率。