【摘 要】
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以新鲜兔骨骼肌为原料,采用离子交换层析,分子筛,疏水层析相结合的办法,分离提纯了肌骼肌肌钙蛋白C(sTnC),将sTnC联结剂到溴化氰活化的Sepharose 4B上制备sTnC-Sepharose 4B
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以新鲜兔骨骼肌为原料,采用离子交换层析,分子筛,疏水层析相结合的办法,分离提纯了肌骼肌肌钙蛋白C(sTnC),将sTnC联结剂到溴化氰活化的Sepharose 4B上制备sTnC-Sepharose 4B亲和层析柱,直接从人心肌组织中分离纯化出心肌肌钙蛋白I(cTnI).以cTnI为抗原,免疫新西兰兔和Balb/c小鼠,分别制备了特异性抗cTnI多克隆抗体和单克隆抗体.将单抗2F11标记生物素,作为固相捕捉抗体,9F5用过碘酸钠法标记制成酶标抗体作为第二抗体,建立一步夹心酶免疫检测血清cTnI.显示出良好的特异性和灵敏度.用所得抗体和表面等离子体子共振生物传感器进行了免疫传感器法检测cTnI的研究,结果夹心法取得了突破性进展,显示出优于其他方法的灵敏度和特异性.为了深入研究cTnI抗体的性质及检测方法,我们尝试了用基因工程手段制备抗cTnI单链抗体.该文用淘选法从噬菌体展示抗体库中筛选出四株(H2、G5、A9、B9)抗cTnI单链抗体,经DNA测序证明均含有轻链和重链可变区基因.
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