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抗苗勒氏管激素(AMH)是转化生长因子β超家族(TGF-β)成员之一,由雌性动物的卵巢分泌,并通过2型受体(AMHR2)发挥其生物学效应。AMH主要通过抑制原始卵泡的募集、降低有腔卵泡对FSH的敏感性而参与调控卵泡生长发育,AMH还可作为评估卵巢储备能力、预测超排反应的有效标志物。然而,有关AMH基因功能的研究多集中于对类固醇激素的调控上,AMH对卵母细胞体外成熟尤其是卵丘扩展的研究报道较少。因此,本实验以昆明鼠的卵母细胞为研究对象,采用体外培养、RT-PCR、Western Blot、ELISA等方法,分别研究AMH对裸卵和卵丘卵母细胞复合体体外成熟的影响,分析AMH对卵丘扩展的调控作用,为提高卵母细胞的利用率奠定基础。主要研究结果如下:(1)AMH及其受体在小鼠卵巢中的表达。通过检测不同日龄小鼠卵巢中AMH及AMHR2的表达,发现AMH和AMHR2在14日龄时表达量最高;还发现AMH仅在卵丘颗粒细胞中表达,而AMHR2在卵丘颗粒细胞与卵母细胞中均有表达,并且AMHR2的表达量随着卵母细胞的发育呈现逐渐下降的趋势,GV期卵母细胞中AMHR2的表达显著高于MI期卵母细胞(P<0.05)。(2)AMH对体外培养裸卵成熟率的影响。在裸卵培养液中分别添加不同浓度的rh-AMH(1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL),体外培养14 h后,发现裸卵的成熟率与AMH浓度呈剂量依赖关系,其中100 ng/mL添加组成熟率最高,且均显著高于对照组和低剂量添加组(P<0.05);随着AMH浓度的升高,MPF的含量逐渐增加,BMP15的表达量逐渐升高;此外,AMH添加组能极显著降低胞质中cAMP含量(P<0.01)。可见,AMH可能是通过上调BMP15表达、促进MPF分泌与降低cAMP的途径来促进裸卵的体外成熟。(3)AMH对卵丘卵母细胞复合体(COC)体外成熟的影响。将100 ng/mL AMH与100 ng/mL FSH单独或联合添加于卵丘卵母细胞复合体(COC)体外培养体系,分析AMH对COC体外成熟的影响。结果发现,与对照组相比,添加100 ng/mL AMH对COC的体外成熟无显著性影响(P>0.05);与FSH单独添加组相比,AMH与FSH联合添加组中COC的成熟率显著降低(P<0.05),提示AMH能抑制FSH对卵母细胞体外成熟的促进作用;此外,还发现AMH能显著抑制FSH促卵母细胞MPF分泌的作用。(4)AMH对体外卵丘扩展的调控作用。将100 ng/mL AMH与100 ng/mL FSH单独或联合添加于卵丘卵母细胞复合体(COC)体外培养体系,分析AMH对卵丘颗粒细胞扩展的调控作用。结果显示,AMH单独处理组对卵丘扩展没有影响,而FSH添加组能显著促进卵丘颗粒细胞的扩展(P<0.05);与FSH单独处理组相比,AMH与FSH联合处理组能显著降低卵丘扩展指数(P<0.05),提示AMH能抑制FSH对卵丘扩展的促进作用。采用RT-PCR法检测各处理中与卵丘扩展相关基因的表达,发现AMH能显著上调卵丘颗粒细胞中Ptgs2 mRNA的表达(P<0.05),而Has2、PTX3和Tnfaip6基因的表达无显著性差异;FSH处理组中Has2、PTX3和Tnfaip6的表达显著升高(P<0.05),而AMH能抑制FSH对Has2、PTX3和Tnfaip6基因表达的上调作用。综上所述,高浓度AMH能显著促进裸卵的体外成熟,但对COC的成熟及卵丘扩展无影响,且AMH能抑制FSH促COC体外成熟及促卵丘扩展的作用。