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胺苯醇类药物(Amphemicols)是一类广谱抗生素,包括氯霉素(Chloramphenicol,CAP)及其代表性衍生物,如甲砜霉素(Thiamphnicol,TAP)和氟苯尼考(Florfenicol,FF)等。它们对革兰氏阴、阳性细菌均有抑制作用,尤其对前者作用较强。在养殖业日趋规模化和集约化的今天,胺苯醇类药物已被广泛用于动物源性食品的生产中。但是,胺苯醇类药物的使用对人体健康带来了潜在的危害。氯霉素对人类骨髓的造血机能有抑制作用,可引发再生障碍性贫血,已被许多国家和地区列为禁用药物。欧盟规定水产品中氯霉素不得检出,美国规定水产品中的最大残留限量(MRL)为0.3μg/kg。甲砜霉素和氟苯尼考是氯霉素的替代产品,氟苯尼考胺(Florfenicol amine,FFA)是氟苯尼考在动物组织中的主要代谢产物。近年来,我国的出口动物源性食品被频频检出氯霉素残留,药物残留已经成为食品对外贸易的主要障碍。为保护人类健康,保障我国的正常出口贸易,控制兽药在动物源性食品中的残留已成为当务之急,而建立灵敏、可靠的残留检测方法是其控制的基础。胺苯醇类药物残留的现有检测方法有微生物法、免疫分析法、化学检测法和其它方法等。其中微生物法易受样品中其它抗生素残留的影响,特异性和灵敏度均较低;免疫法易出现假阳性结果;色谱法的样品前处理复杂;色谱-质谱联用技术灵敏度高,是重要的定性定量检测方法。目前报道的胺苯醇类药物残留检测大多对象单一,且未见检测氟苯尼考胺的质谱方法报道。而实际的动物源性食品中常常是多种胺苯醇类药物同时存在,急需发展操作简便、灵敏度高的多残留同时检测技术。本文基于胺苯醇类药物的性质,优化了氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺等4种胺苯醇类药物的提取和净化条件,采用气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)和液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),建立了动物源性食品中胺苯醇类药物的同时检测方法,取得了如下主要研究成果:1.获得了胺苯醇类药物的最佳提取条件以猪肉和肠衣为实验材料,采用甲醇、乙腈、丙酮和乙酸乙酯等4种有机溶剂提取胺苯醇类药物,比较了不同溶剂的提取效果,结果表明含2%氨水的碱化乙酸乙酯对4种药物的提取效果较好,回收率在90%以上。2.获得了提取液的最佳净化条件研究发现液-液萃取和固相萃取均能取得良好的净化效果。其中LC-MS/MS法灵敏度高,提取液经液-液萃取后即可进行分析;HPLC法、GC法和GC-MS法均需要对提取液进行液-液萃取和固相萃取后才能进样分析,否则会由于基质的影响而干扰测定。MCX柱、C18柱和HR-X柱对胺苯醇类药物有较好的保留效果,只有MCX柱对4种药物都有很好的保留效果,且回收率均在95%以上。3.优化了样品的衍生化条件在用GC法和GC-MS法检测胺苯醇类药物时,必须对样品进行衍生化处理,生成热稳定性强和易挥发的衍生物。结果表明,衍生化温度在50-70℃、衍生化时间在40 min左右时,上述两种方法能很好地检测4种药物。研究发现衍生化后吹干衍生化试剂,造成回收率略微偏低,操作不易控制。通过加入甲苯定容,再用NaOH溶液灭活衍生化试剂,取上层有机相进行检测加以解决。4.建立了胺苯醇类药物多残留的同时检测方法采用HPLC法(紫外检测器检测),可同时检测肉类和肠衣中的氟苯尼考和氟苯尼考胺残留,获得的检测低限均为100μg/kg;采用LC-MS/MS法,可同时检测肉类和肠衣中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留,获得的检测低限分别为0.1μg/kg、0.1μg/kg、0.1μg/kg和8.0μg/kg;采用GC法(电子捕获检测器检测),可同时检测肉类和肠衣中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留,猪肉中4种药物的检测低限分别为0.1μg/kg、2.0μg/kg、2.0μg/kg和2.0μg/kg,肠衣中4种药物的检测低限分别为0.2μg/kg、4.0μg/kg、4.0μg/kg和4.0μg/kg;采用GC-MS法,可同时检测肉类和肠衣中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留,猪肉中4种药物的检测低限均为0.1 ng/g,肠衣中4种药物的检测低限分别为0.2μg/kg、0.2μg/kg、0.2μg/kg和2.0μg/kg。