山楂黄烷醇对大鼠离体胸主动脉环舒张作用研究

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目的:对山楂黄烷醇的舒张血管作用进行系统的考察,以期发现其中内皮依赖性舒张血管的具体成分,探索其构效规律和作用机制,并为其在预防和治疗心血管疾病方面的保健应用提供参考。方法:采用离体大鼠胸主动脉环张力试验法,以累积加药的方式,系统地考察山楂黄烷醇对去氧肾上腺素(PE)预收缩离体大鼠胸主动脉环的舒张作用,研究内容包括:1.采用内皮完整和去内皮大鼠胸主动脉环两种标本,对山楂两种不同工艺层次提取物山楂糖浆(HS)和山楂黄烷醇(HF)粗提物的舒张血管作用进行内皮依赖性的考察;2.结合HPLC分析手段,对HF粗提物经正相硅胶、Sephadex LH-20凝胶层析分离得到的两组系列馏分进行血管舒张作用的检索和分析;3.对山楂黄烷醇EC、B2、B5、C1、C2、C3、D1纯品及C1、D1的未完全纯化物进行离体血管舒张作用考察;4.观察去内皮或L-亚硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)、亚甲蓝(MB)、吲哚美辛(Indo)预处理对D1未完全纯化物内皮依赖性舒张作用的影响。采用GraphPad Prism5.0软件对数据进行统计学处理。结果:1. HS和HF粗提物(在黄烷醇类物质浓度约为14~140mg/L范围内)对PE预收缩的大鼠离体胸主动环均具有浓度依赖性的舒张作用。去除血管内皮可以使HS的舒张血管作用明显减弱,使HF粗提物的作用基本消除。2. HF粗提物经正相硅胶柱分离得到的6个馏分中,后期接收的第4、5、6馏分产生了卓越的舒血管作用(质量浓度3~20mg/L浓度范围内);Sephadex LH-20分离得到的6个馏分中,后期接收的第4馏分产生了相对卓越的舒血管作用(质量浓度3~100mg/L浓度范围内)。结合HPLC分析,其有效成分可能是山楂黄烷醇聚合体或分离过程中的未知伴生物。3.山楂黄烷醇EC、B2、B5、C1、C2、C3、D1纯品具有温和的舒张血管作用,其中,主成分的单体EC和二聚体B2、B5在1~100mg/L浓度范围内基本无效应,三聚体和四聚体则较为突出,在浓度30~300mg/L范围内可以产生舒张作用。7种HF的舒张作用因聚合度和键合方式不同而呈现差异,C1、D1较为突出;D1在17.3mg/L即表现出舒张作用,是引发血管舒张反应最为灵敏的化合物,其最大舒张率达(65.1±2.8)%。4. C1、D1未纯化组分均具有内皮依赖性血管舒张作用,且相比于C1、D1纯化合物,诱发血管舒张的有效浓度明显降低。D1未纯化物的效应比D1纯化合物高近7倍(EC50(Unpurified D1)=11.8mg/L,EC50(D1)=94.5mg/L)。L-NAME和MB预处理使D1未纯化物的舒张效应基本消除,而Indo对其影响并不显著;L-NAME、MB、Indo对D1纯化合物的舒张作用也产生了相同影响(数据未给出)。结论:1.离体试验中,山楂黄烷醇粗提物确实具有内皮依赖性血管舒张作用,并且其有效成分的作用机制很可能是通过作用于eNOS,进而诱发NO-cGMP途径介导的内皮依赖性血管舒张,而与PGI2的合成无关。2.山楂黄烷醇纯品具有温和的内皮依赖性血管舒张作用,受聚合度和键合方式影响其效应间存在差别,其中三聚体、四聚体有效浓度更低,D1效用最为突出。山楂黄烷醇粗提物中最为有效的舒张血管成分很可能不是EC、B2、B5、C1、C2、C3、D1这些黄烷醇纯品,以及绿原酸。3.一些未知的山楂黄烷醇类的色谱伴生成分可能是引起内皮依赖性血管舒张作用的更有效成分。
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