论文部分内容阅读
菊花在我国有悠久的栽培历史,是世界上最重要的观赏花卉之一。菊花除具有观赏功能外,许多品种可以入药。然而菊花在生长过程中常遭受多种虫害,其中菊天牛危害最为严重。当菊花出售时,菊花上的微量虫害就会影响菊花的销售状况,因此需要使用保护性的杀虫剂来防止虫害的发生。本研究利用基因工程技术将抗鞘翅目害虫基因mBt886Cry3Aa导入菊花,获得抗鞘翅目害虫的转基因菊花,并测定其对菊天牛的毒杀效果,为有效防治鞘翅目害虫提供一个新途径。研究结果如下:1.菊花遗传转化再生体系的建立以菊花“北京黄”Dendrathema grandiflorum kitam茎段和茎尖为外植体,对最适分化培养基和最佳生根培养基进行筛选。结果表明,菊花“北京黄”茎段的最适分化培养基组合为MS + 6-BA 0.25 mg·L-1 + NAA 0.1 mg·L-1,分化率100%,且分化出的小苗长势良好;菊花“北京黄”不定芽的最佳生根培养基组合为1/2MS + NAA 0.05 mg·L-1,生根率100%,且根粗而长;不同浓度的卡那霉素Kanamycin和头孢噻肟钠cefotaxime对菊花茎段分化和不定芽生根影响不同,15mg·L-1的卡那霉素可以抑制茎段的分化,10mg·L-1的卡那霉素完全抑制不定芽的生根,400mg·L-1的头孢噻肟钠不但可以有效地除去残留的农杆菌,还不影响菊花茎段的分化。2.含mBt886Cry3Aa基因的植物表达载体转化农杆菌将含mBt886Cry3Aa基因的植物表达载体冻融法转化农杆菌,经PCR检测,获得含mBt886Cry3Aa基因的农杆菌工程菌株材料。3.农杆菌介导法转化菊花菊花“北京黄”茎段经农杆菌浸染后,在选择分化培养基MS + 6-BA 0.25 mg·L-1 + NAA 0.1 mg·L-1 + km15 mg·L-1 + cef 400 mg·L-1上培养,培养条件为光周期16h/8h,温度25℃,经继代选择培养筛选得到抗性苗,将其接种在选择生根培养基1/2MS + NAA0.05 mg·L-1 + km10mg·L-1上进行培养,共得到33棵生根苗,再生苗8cm左右时,人工移栽室外生长。经PCR检测,得到7株转mBt886Cry3Aa基因菊花。4.转基因菊花对菊天牛室内生物测定利用转基因菊花对菊天牛进行室内生物测定,将转基因菊花与人工饲料以1:10的比例混合饲养菊天牛2龄幼虫,B1、B2、B3、B4分别代表1-4号转基因菊花。测试结果表明:菊天牛2龄幼虫取食转基因植株B4、B2、B3后的死亡率与对照幼虫(CK)死亡率差异显著。其中B4毒杀效果最好,校正死亡率达57.14%;B2、B3毒杀效果次之,校正死亡率分别为49.99%和42.86%;B1校正死亡率为35.71%,其对2龄幼虫的毒杀作用与对照幼虫(CK)死亡率差异不显著,但高于对照幼虫(CK)死亡率。