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刚地弓形虫（Toxoplasma gondii, T.gondii）属于项复门原虫，是专性细胞内寄生虫，是人类重要的机会致病性病原体。弓形虫的感染呈世界性分布，免疫功能正常的感染者常表现为隐性感染，缺乏特异性的临床症状和体征，容易被忽视，但当感染者的免疫功能下降或受损时，如HIV病毒感染者、器官移植者和肿瘤患者等，弓形虫对宿主的危害是非常严重甚至是致命的。孕妇感染弓形虫后可导致流产、早产、胎儿死亡和严重畸形等情况。目前，尚无有效药物可根治弓形虫病。 本研究选取弓形虫棒状体蛋白10(ROP10)和棒状体蛋白18(ROP18)为研究对象，构建了真核重组表达载体pVAXD-ROP10-ROP18，将其转染HeLa细胞后，经RT-PCR和间接免疫荧光实验检测其表达情况。用重组质粒免疫BALB/c小鼠，检测体液免疫和细胞免疫指标，评价重组质粒疫苗对小鼠的免疫保护作用。 首先，复苏弓形虫速殖子，提取虫体的总RNA并逆转录为cDNA，根据GenBank中提供的ROP10（登录号为DQ124368.1）和ROP18（登录号为AM075204.1）基因序列，设计引物，以cDNA为模板扩增ROP10和ROP18基因，克隆至pVAX1载体上，经测序验证正确后，将ROP10和ROP18基因分别定向插入双启动子载体pVAXD的多克隆位点中，构建重组质粒pVAXD-ROP10和pVAXD-ROP18。然后将ROP18基因插入pVAXD-ROP10中，构建重组质粒pVAXD-ROP10-ROP18，经PCR鉴定，可扩增出1761bp和1665bp的两个条带;经NheⅠ和AflⅡ双酶切鉴定，产生约5600 bp和1665 bp的两个条带，表明重组质粒pVAXD-ROP10-ROP18构建正确。 其次，将重组质粒p VAXD-ROP10、pVAXD-ROP18和pVAXD-ROP10-ROP18转入HeLa细胞，用RT-PCR和间接免疫荧光法检测目的基因表达情况，在mRNA水平证实了ROP10和ROP18基因在pVAXD载体中的共表达，间接免疫荧光实验显示细胞内产生绿色荧光，表明ROP10和ROP18可以在真核细胞内表达日的蛋白。 最后，碱裂解法制备大量质粒免疫小鼠，分为7组:空白组、PBS组、pVAXD组、pVAXD-ROP10组、pVAXD-ROP18组、pVAXD-ROP10+pVAXD-ROP18组和pVAXD-ROP10-ROP18组，每组10只。各组均采取股四头肌注射方式，每次免疫间隔两周，共免疫三次。用ELISA方法检测小鼠抗体水平的变化情况和细胞因子IFN-γ、IL-2、IL4和IL-10的浓度，末次免疫后两周进行弓形虫速殖子攻击感染实验，记录各组小鼠存活时间。结果表明随着免疫次数的增加，各重组质粒组小鼠的IgG水平逐渐升高，末次免疫后pVAXD-ROP10+pVAX D-ROP18组(0.775)和pVAXD-ROP10-ROP18组(0.791)小鼠IgG水平与其它组相比有统计学意义(P＜0.05)。pVAXD-ROP10+pVAXD-ROP18组和pVAXD-ROP10-ROP18组小鼠的IFN-β的浓度均值分别为377.42 pg·ml-1、385.35 pg·ml-1;IL-2的浓度均值分别为254.49 pg·ml-1、263.18 pg·ml-1; IL-4的浓度均值分别为208.79 pg·ml-1、181.06 pg·ml-1;IL-10的浓度均值分别为266.6 pg·mr-1、259.82 pg·ml-1，与其它组相比有显著性差异(P＜0.05)。攻击实验后pVAXD-ROP10+p VAXD-ROP18组和pVAXD-ROP10-ROP18组的生存时间（153.6h和165.6h）与其它组相比得到显著延长（P＜0.05），但两组之间相比无显著性差异（P＞0.05），说明复合基因的免疫效果优于单基因的免疫效果，为弓形虫疫苗的研制提供了实验基础。