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南极具有独特的地理及气候特征,其主要特点是变化极大的光照辐射、季节性的光照时间;常年极低的水温(通常在–1.8℃~2.0℃),在冬季最低温度可以达到–50℃;高盐度环境(海水中的盐度一般为34‰~35‰),海冰中的盐囊和盐通道的盐度可达到150‰,因此形成了一个酷寒、强辐射和高盐度的自然环境。为了适应极端的环境,生存于其中的微生物必然具备了相应独特的生理生化和分子机制。因此南极微生物不仅是研究在低温条件下生物适应性的极好材料,而且也是获得在低温条件下具有较大催化能力的适冷酶类的最佳来源。对南极微生物及其产生适冷酶的研究有着重要的生物学意义;同时,由于适冷酶能在低温下有效发挥催化作用的特点,在生物工程领域有着广阔的应用前景。本研究以南极海冰嗜冷菌Colwellia sp.NJ341为研究对象,对该菌株分泌的胞外适冷丝氨酸蛋白酶进行系统的研究,同时对该菌株的低温适应性也予以初步探讨,以期为南极微生物的深入研究和开发应用提供科学依据。(1)采用水解酪蛋白平板法对本试验室保存的260株南极低温微生物产适冷蛋白酶情况进行测定,发现107株具有蛋白酶活性,其中5株菌(NJ276、NJ341、NJ16-70、NJ345、NJ5-9)所产的蛋白酶活性高于45 U/ml。除NJ5-9菌株外,对其余4株菌所产蛋白酶的部分酶学特性进行研究,发现蛋白酶的酶学性质及酶的种类和数量在种间存在差异。菌株NJ276、NJ16-70分泌的蛋白酶接近中温蛋白酶,NJ341、NJ345分泌的蛋白酶属于适冷蛋白酶。随后,对5株菌进行了16S rRNA分子鉴定,菌株NJ276、NJ5-9、NJ16-70、NJ345均属于假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.);菌株NJ341属于科尔韦尔氏属(Colwellia sp.)。(2)以国内外研究较少且只分泌一种适冷蛋白酶的嗜冷菌Colwellia sp.NJ341作为研究材料,进行酶的优化培养、分离纯化及酶学性质的研究。结果表明,菌株NJ341发酵培养基的初始pH和通气量的最适值,分别为pH7~9和50~120