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背景:
急性早幼粒细胞性白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)约占急性非淋巴系白血病的8-15%。在体外全反式维甲酸(all trans retinoicacid,ATRA)诱导HL60,U937和原代APL发生终末分化的实验结果基础上,我国学者1986年首次用ATRA治疗APL,并获得成功。在体外实验的基础上,三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)被用以治疗APL患者,亦获得成功。
细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecuarl,ICAM-1或CD54)属于免疫球蛋白超家族成员,是淋巴细胞相关抗原-1((LFA-1)的主要配体。作为白细胞分化抗原,ICAM-1是细胞黏附、迁移及提呈抗原的重要介导分子,参与细胞的信号转导与活化、细胞的伸展和移动、细胞的生长以及分化、炎症、血栓形成、肿瘤转移、创伤愈合等一系列重要生理和病理过程。在各种因素作用下,ICAM-1的细胞膜外部分可脱落进入血循环,成为可溶性形式(Soluble ICAM-1,sICAM-1)。sICAM-1相对分子质量为82×103,仍具有结合配体LFA-1的活性,从而与多种病理生理过程有关,如肿瘤进展及免疫抑制。癌症患者血清sICAM-1水平升高与肿瘤侵犯有关,初治、治疗后未缓解及复发性ALL和AML患者的血清sICAM-1水平明显高于健康人,对临床诊断有一定价值。另外高水平sICAM-1及VCAM-1均与血白细胞数显著相关,sICAM-1还可影响NK细胞的活力,并可通过抑制ICAM-1/LFA-1系统而阻遏免疫反应。
关于血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1或CD106)的报道较少,已知培养的活化内皮细胞、人的血清、类风湿病人滑膜液中可以检测到sVCAM-1。sVCAM-1可以通过结合其配体抑制白细胞向组织的移动,同时还是配体结合的竞争抑制剂。
ICAM-1和VCAM-1作为监测急性白血病的早期复发、髓外浸润和判断预后的指标已得到证实。探讨VCMA和ICMA在APL发生、发展和缓解中的作用,并进一步明确APL患者诱导分化治疗前后粘附分子ICAM-1和VCAM-1变化的临床意义将有助于为治疗难治性、复发性白血病开辟新途径。
目的:
检测白血病患者As2O3治疗前后白细胞数量和种类变化,阐明粘附分子sICAM-1和sVCAM-1的表达、分泌变化规律,以及As2O3体外诱导后,APL原代细胞分泌sICAM-1和sVCAM-1的水平变化,并检测As2O3治疗前后粘附分子ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达情况,预期揭示粘附分子sICAM-1和sVCAM-1与白血病之间的关系以及检测粘附分子sICAM-1和sVCAM-1的分泌水平在白血病诊断、治疗及预后监测中的临床意义。
方法:
采用RT-PCR检测PML/RARα融合基因类型;常规细胞计数检测治疗前后APL患者外周血白细胞数量和分类变化;采用ELISA法检测治疗前后APL患者外周血粘附分子sICAM-1和sVCAM-1的变化;采用ELISA法检测As2O3对原代APL细胞分泌sICAM-1和sVCAM-1的影响;采用流式细胞术检测As2O3治疗前后白血病细胞表面粘附分子CD11b,CD54和CD106的表达;采用甲基纤维素半固体培养法检测As2O3对L-CFU集落的影响:通过RT-PCR检测As2O3治疗前后APL患者ICAM-1和VCAM-1mRNA表达变化;采用MTT法检测0.5μmol/L的As2O3作用后对APL细胞体外增殖的影响。
结果:
1.经RT-PCR检测,患者APL细胞扩增出长型(L-type)和短型(S-type)PML/PAR a融合基因。
2.三氧化二砷一般在7~10天内诱导明显的外周血白细胞升高,平均第15天达到高峰,早幼粒比例下降,细胞分类以中幼粒样细胞为主,较成熟粒细胞比例上升,白细胞升高持续12~15天,随后逐渐降低,缓解后恢复到正常水平。
3.ELISA检测结果表明,治疗前APL患者血清中sICAM-1水平显著高于对照组,治疗后5-13天血清sICAM-1水平升高,第7天达到最高,此后逐渐下降,30天时接近正常水平。APL患者血清中粘附分子sVCAM-1水平明显高于正常对照组,而治疗后第7天达到最高,7-13天血清sVCAM-1水平高于治疗前。治疗13天后逐渐下降,30天后接近正常水平。As2O3对正常单个核细胞的粘附分子sICAM-1和sVCAM-1无明显影响,对原代APL细胞分泌粘附分子sICAM-1和sVCAM-1影响不同,应用As2O3后,原代APL细胞分泌粘附分子sICAM-1的水平升高不明显,但sVCAM-1的分泌水平显著升高。
4.流式细胞仪测定结果表明APL细胞经过As2O3诱导后,粘附分子CD11b、CD54和CD106明显升高,并且药物达到高峰期后,粘附分子CD11b、CD54和CD106的表达也达到高峰。
5.L-CFU随着诱导分化治疗呈现逐渐下降趋势,缓解后L-CFU细胞几乎不生长,仅有少量集落形成。
6.治疗前sVCAM-1和sICAM-1的基因表达水平较低,治疗后sVCAM-1和sICAM-1的基因表达均增强,并且随着治疗时间的延长,表达量上调。
7.As2O3在体外能显著抑制APL原代细胞的增殖,并且随着作用时间延长,抑制率升高。
结论:
三氧化二砷可诱导APL细胞由早幼粒细胞向成熟细胞分化,治疗初期As2O3诱导白细胞升高,但缓解后可恢复到正常水平。As2O3诱导分化治疗可提高APL患者血清中sVCAM-1和sICAM-1分泌水平,并且上调sVCAM-1和sICAM-1的mRNA表达水平。随着APL细胞的分化成熟,患者病情缓解,sVCAM-1和sICAM-1分泌恢复到正常水平。As2O3在体外可抑制原代APL细胞增殖,抑制L-CFU集落形成,上调细胞分泌sVCAM-1的水平。