前言 上皮钙粘连素(E-cadherin)作为上皮细胞间主要的粘附分子，其表达异常缺失是肿瘤细胞浸润转移的主要原因。E-cadherin的胞浆端靠连环素(catenin)家族来与肌动蛋白细胞骨架连接，形成稳定的复合体。连环素(catenin)家族包括α-catenin、β-catenin、υ-catenin和P120，它们除了和E-cadherin一起介导细胞间粘附行为，还在核内发挥信号转导作用。 P120(P120ctn)是连环素家族新发现的一员，它的生物学功能还没有被人们完全了解。P120最早发现是作为Src癌蛋白的底物，cDNA克隆技术发现它包含一段犰狳(Armadillo)重复序列，这与其他连环素一样。但P120在胞浆中与E-cadherin相连，不与肌动蛋白和α-catenin相连。其分子量为120kDa，基因位于11q11。通过对N-端和C-端的不同切割，P120有四种亚型，分子量分别为95KD，105KD，112KD和120KD。在核内P120与转录因子Kaiso结合，但功能不明。 本实验采用免疫组织化学的方法检测了143例非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC)中P120的表达情况，目的在于探讨其与非小细胞肺癌组织分型、病理分期、分化程度、淋巴结转移和预后的关系。同时采用Western Blot对36例非小细胞肺癌组织检测了P120的表达情况，并与免疫组织化学的结果进行比较。 材料与方法 1．材料 免疫组化方法共用 143例非小细胞肺癌标本。其中 80例非小细胞肺癌组织蜡块来自鞍山肿瘤医院外科手术切除并有完整随访资料的标本。另外63例来自中国医科大学第一附属医院2001年 11月－2002年 9月外科手术标本。标本均经 10％中性福尔马林固定，石蜡包埋。Western Blot所用的36例新鲜肺癌组织及癌旁正常肺组织来自中国医科大学附属第一临床医院 200年 11月－2002年 9月外科手术标本。 2．主要试剂和来源 鼠抗人 P120单克隆抗体（P17920－050）购自美国 Transduc－non公司，S－P超敏免疫组织化学试剂盒（KIT－97）和 DAB酶底物显色试剂盒（DAB－003）均购自福州迈新生物技术公司。碱性磷酸酶标记的羊抗鼠二抗和显色试剂盒购自华美公司。 3．方法 3．IWestern Blot 取新鲜样品门－2克）加裂解缓冲液，剪碎、匀浆超声处理，高速低温离心提取上清蛋白，电泳、转印，经封闭后加相应的一抗、二抗及显色试剂检测。图像扫描，测定P120全部亚型的灰度值。 3．2 免疫组织化学检测 采用链菌素抗生物素蛋白－过氧化物酶免疫组化法门S－P法八结果判定：每张切片选5个高倍视野，每高倍视野计数200个瘤细胞。染色强度与正常支气管粘膜上皮相同，并且膜阳性肿瘤细胞290％，则称为表达正常；如果染色强度减弱，或者阳性肿瘤细胞＜90啪，或者染色出现在胞浆中，则称为表达异常。 4．统计学分析 ·2· 各组计数资料利用 SPSS for Windows10刀软件包，采用 X‘检验或Fisher准确概率法进行统计分析。用Kaplan－Meter方法绘制生存曲线，评估生存率，用og－ranx方法检验不同患者分组之间生存率差别，计算P值小于0．05有统计学意义。用C似’S比例风险回归模型研究不同因素对生存率的影响，如果因素P值小于0．05有统计学意义。Westeni Blot图像的灰度值分析采用配对t检验。P值小于0．05为有统计学意义。 结 果 1．免疫组织化学结果 P120在正常支气管粘膜上皮细胞表达定位于细胞膜，反应呈强阳性反应，无胞浆蓄积。在143例非小细胞肺癌病例中，有ZI例表达正常。122例表达异常，出现细胞膜表达减弱，和／或出现胞浆表达，异常表达率为85．3％。P120在肺腺癌和鳞癌异常表达率分别为趴．4％O4／64厂86．1％N＆叮9入二者无明显差异什－O．248人在高中分化非小细胞肺癌中，＊2o的异常表达率为84．4％，而低分化非小细胞肺癌中P120异常表达率为86．8％，H者差别无显著性意义u＝0．372人 I、11期病例中 P120异常表达率为 60．5％，明显低于皿 ＊期病例中 P120的异常表达率门4．2％厂二者之间差别有显著性意义（P＝0．005人在88例有淋巴结转移病例中，其中有84例乃5．4％）出现了P120的表达改变，而在55例无淋巴结转移病例中，有38例N9．1％）出现了P120的表达改变，H者差异有显著性意义瞩二 0．008人用 Cox’s比例风险模型分析，P120的异常表达是影响非小细胞肺癌患者预后因素。 2·Weste。BIOt的结果 由于 P120四种亚型的存在，应用 P120单克隆抗体检测，发现 ·3·从95KD到 120KD处发现几条特异性条带。正常组织可见全部亚带，而肿瘤组织常缺乏某种亚带表达或弱表达。 讨 论 P120在一些恶性肿瘤组织中的表达情况已有报道，如在胃癌、结直肠癌、膀耽癌厚腺癌等，其主要改变为细胞膜表达下降，和／或出现胞浆表达。本研究应用免疫组化方法，对143例非小细胞肺癌进行了检测，发现