论文部分内容阅读
DUF647(Domain of unknown function)基因家族是拟南芥基因组中一个功能未知的基因家族,由基因AT1G13770、AT2G23470、AT2G31190、AT3G45890、AT5G01510和AT5G49820组成。通过EMS诱变筛选已获得了基因AT2G31190和AT3G45890的突变体。但迄今为止还没有基因AT1G13770、AT2G23470、AT5G01510和AT5G49820的突变体,因此对其功能的研究受到了很大的限制。人工微小RNAs(artificial microRNAs,amiRNAs)基因沉默技术是一种研究基因功能的有效手段。本论文工作利用amiRNAs对拟南芥DUF647家族成员AT1G13770、AT2G23470、AT5G01510和AT5G49820进行基因沉默研究,试图得到这4个基因敲除的突变体,从而研究这些基因的功能,这对于系统了解DUF647家族基因在拟南芥生命活动中的作用具有重要的意义。 本论文工作利用WMD平台设计了靶向基因AT1G13770、AT2G23470、AT5G01510、AT5G49820的amiRNAs;通过重叠PCR,以质粒pRS300为模板合成了含有我们所设计的amiRNAs序列的amiRNAs前体;构建了融合amiRNAs前体的植物表达载体pCHF3-amiRNAs;通过农杆菌AGL1介导用蘸花法将amiRNAs前体转入拟南芥中;通过卡那霉素抗性筛选和PCR检测获得了基因组内整合有amiRNAs的转基因拟南芥植株;利用RT-PCR检测到了靶基因表达下调的转基因株系;这些转基因株系都表现出了较明显的突变表型,尤其是AT1G13770-amiRNA和AT5G49820-amiRNA转基因株系,营养器官和生殖器官均出现了不同程度的发育缺陷。这些结果表明基因AT1G13770、AT2G23470、AT5G01510、AT5G49820在拟南芥发育过程中具有非常重要的作用。